[發明專利]一種莽草酸生產菌株及其構建方法無效
| 申請號： | 200610030985.8 | 申請日： | 2006-09-08 |
| 公開（公告）號： | CN101139566A | 公開（公告）日： | 2008-03-12 |
| 發明（設計）人： | 楊晟;鄭華寶;胡世元;楊俊杰;孫周通;范文超;黃鶴;詹劍;蘆銀華;姜世民;王金剛;李宇偉;陳磊;關春鴻;邵麗君;刁劉洋;陳軍;楊蘊劉;姜衛紅 | 申請（專利權）人： | 中國科學院上海生命科學研究院 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/09;C12P7/42;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海智信專利代理有限公司 | 代理人： | 繆利明 |
| 地址： | 200031*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 莽草 生產 菌株 及其 構建 方法 | ||
1.一種莽草酸生產菌株的構建方法，其特征在于包括以下步驟：
A、構建aroL和aroK雙基因敲除的菌株W3110(ΔaroL?ΔaroK)；
B、構建含有莽草酸代謝途徑中的關鍵基因aroF、aroE、aroB、ppsa以及tktA基因的重組表達質粒pSUFEBPT；
C、將重組表達質粒pSUFEBPT轉入雙敲除菌株W3110(ΔaroL?ΔaroK)獲得表達莽草酸的生產菌株。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟A包括：
a、構建aroL單基因敲除的菌株BW25113(ΔaroL)；
b、構建aroK單基因敲除的菌株BW25113(ΔaroK)；
c、分別以BW25113(ΔaroL)和BW25113(ΔaroK)作為供體和受體，通過P1噬菌體轉導方法獲得aroL和aroK雙基因敲除菌株BW25113(ΔaroLΔaroK)；
d、以雙敲除菌株BW25113(ΔaroLΔaroK)作為供體，W3110作為受體，利用P1噬菌體轉導方法獲得雙敲除菌株W3110(ΔaroLΔaroK)。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟B包括依次將aroF、aroE、aroB、ppsa以及tktA基因克隆至pSU2718質粒，獲得重組表達質粒pSUFEBPT。
4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述重組表達質粒pSUFEBPT所含的aroF基因帶有自身啟動子。
5.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述重組表達質粒pSUFEBPT所含的aroE基因帶有trc啟動子。
6.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述重組表達質粒pSUFEBPT所含的ppsa基因帶有自身啟動子。
7.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟C包括將大腸桿菌宿主菌W3110(ΔaroLΔaroK)制成感受態細胞，然后用化學轉化方法將重組表達質粒pSUFEBPT轉入所述感受態細胞，從而獲得莽草酸生產菌株。
8.如權利要求1～7中任一項所述的方法構建的莽草酸生產菌株。
9.如權利要求8所述的莽草酸生產菌株，其特征在于，該菌株的保藏號為CCTCC?M206083。
10.一種莽草酸的生產方法，其特征在于，通過發酵培養權利要求8或9的莽草酸生產菌株獲得莽草酸。
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