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[發(fā)明專利]重組人甘露聚糖結合型凝集素無效

專利信息
申請?zhí)枺?/td> 00809713.5 申請日: 2000-05-10
公開(公告)號: CN1359420A 公開(公告)日: 2002-07-17
發(fā)明(設計)人: 斯蒂芬·蒂爾;詹斯·C·詹斯尼厄斯;托馬斯·V·詹森 申請(專利權)人: 斯蒂芬·蒂爾;詹斯·C·詹斯尼厄斯;托馬斯·V·詹森
主分類號: C12N15/12 分類號: C12N15/12;C07K14/47;A61K38/17
代理公司: 北京市柳沈律師事務所 代理人: 巫肖南,封新琴
地址: 丹麥*** 國省代碼: 暫無信息
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摘要:
搜索關鍵詞: 重組 甘露 聚糖 結合 凝集素
【權利要求書】:

1.制備大小分布譜與天然人MBL至少有50%相同的人重組甘露聚糖結合型凝集素(MBL)組合物的方法,包括如下步驟:

-制備編碼人MBL肽或其功能等價體的基因表達構建體,

-用該構建體轉化宿主細胞培養(yǎng)物,

-培養(yǎng)該宿主細胞,從而使所述多肽表達并將其分泌到培養(yǎng)基中,隨后,

-將該培養(yǎng)基在碳水化合物衍生化基質中進行親和層析,該碳水化合物衍生化基質對MBL亞單位的四聚體、五聚體和/或六聚體的親和力比對MBL亞單位二聚體的親和力至少高2倍,

-獲得包含人重組MBL組合物的洗脫物。

2.根據(jù)權利要求1的方法,其中所述基因表達構建體包括人MBL基因或其功能等效體的至少一個內含子序列。

3.根據(jù)權利要求1的方法,其中所述基因表達構建體包括人MBL基因或其功能等效體的至少兩個外顯子序列。

4.根據(jù)權利要求1的方法,其中所述基因表達構建體包括編碼MBL亞單位或其功能等效體的cDNA序列。

5.根據(jù)權利要求1的方法,其中所述宿主細胞培養(yǎng)是在體外培養(yǎng)。

6.根據(jù)權利要求1的方法,其中所述宿主細胞培養(yǎng)是在體內培養(yǎng)。

7.根據(jù)權利要求6的方法,其中所述宿主細胞培養(yǎng)是在轉基因動物中培養(yǎng)。

8.根據(jù)權利要求1的方法,其中所述宿主細胞培養(yǎng)是真核宿主細胞培養(yǎng)。

9.根據(jù)權利要求8的方法,其中所述宿主細胞培養(yǎng)是哺乳動物宿主細胞培養(yǎng)。

10.根據(jù)權利要求1的方法,其中所述基質本身對MBL基本上沒有親和力。

11.根據(jù)權利要求10的方法,其中所述基質本身不含碳水化合物。

12.根據(jù)權利要求11的方法,其中所述基質本身由不含碳水化合物的多聚體材料組成。

13.根據(jù)權利要求12的方法,其中所述基質由塑料珠組成。

14.根據(jù)權利要求1的方法,其中所述多肽組合物的分離在已碳水化合物衍生化基質上進行。

15.根據(jù)權利要求14的方法,其中所述多肽組合物的分離在甘露糖衍生化基質上進行。

16.根據(jù)權利要求1的方法,其中所述碳水化合物衍生化基質對MBL亞單位和/或MBL亞單位二聚體基本上沒有親和力。

17.根據(jù)上述任一權利要求的方法,其中所述碳水化合物衍生化基質基本上只對重組MBL亞單位的四聚體具有親和力。

18.根據(jù)上述任一權利要求的方法,其中所述碳水化合物衍生化基質基本上只對重組MBL亞單位的五聚體具有親和力。

19.根據(jù)上述任一權利要求的方法,其中所述碳水化合物衍生化基質基本上只對重組MBL亞單位的六聚體具有親和力。

20.根據(jù)上述任一權利要求的方法,其中所述碳水化合物衍生化基質基本上只對重組MBL亞單位的四聚體、五聚體和/或六聚體具有親和力。

21.根據(jù)上述任一權利要求的方法,其中所述大小分布譜基本上與天然人血漿MBL相同。

22.含MBL亞單位寡聚體的重組人MBL組合物,所述寡聚體的大小分布譜與天然人血漿MBL的大小分布譜至少有50%相同。

23.根據(jù)權利要求22的組合物,其中所述大小分布譜與天然人血漿MBL的大小分布譜至少有95%相同。

24.根據(jù)權利要求22的組合物,其中MBL亞單位的四聚體、五聚體和/或六聚體與二聚體的比例至少為2∶1,優(yōu)選至少為5∶1。

25.根據(jù)權利要求22的組合物,其中MBL組合物基本上不含任何當在天然宿主器官中產生時與MBL天然相聯(lián)的雜質。

26.根據(jù)權利要求22-25中任何一項的組合物,其中所述大小分布譜是通過SDS-PAGE和/或Werstern印跡進行評定。

27.根據(jù)權利要求22-26中任何一項的組合物,其處于非變性狀態(tài)。

28.根據(jù)權利要求22-26中任何一項的組合物,其處于變性狀態(tài)。

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