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[發明專利]編碼pfkA基因的新核苷酸序列無效

專利信息
申請號: 00132480.2 申請日: 2000-11-21
公開(公告)號: CN1297054A 公開(公告)日: 2001-05-30
發明(設計)人: 貝蒂娜·默克爾;瓦爾特·普費弗勒 申請(專利權)人: 德古薩-于爾斯股份公司
主分類號: C12N15/10 分類號: C12N15/10;C12N15/31;C12N15/52;C07H21/00;C12P13/04;C12Q1/68
代理公司: 永新專利商標代理有限公司 代理人: 林曉紅
地址: 聯邦德國美因*** 國省代碼: 暫無信息
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 編碼 pfka 基因 核苷酸 序列
【權利要求書】:

1、來自棒狀細菌的分離的多核苷酸,其含有選自如下一組的多核苷酸序列:

a)與編碼包括SEQ?ID?NO:2的氨基酸序列的多肽的多核苷酸至少70%相同的多核苷酸,

b)編碼含有與SEQ?ID?NO:2的氨基酸序列至少70%相同的氨基酸序列的多肽的多核苷酸,

c)與a)或b)的多核苷酸互補的多核苷酸,以及

d)含有a),b)或c)的多核苷酸序列的至少15個連續堿基的多核苷酸。

2、權利要求1的多核苷酸,其中多核苷酸是能在棒狀細菌中復制的優選地是重組的DNA。

3、權利要求1的多核苷酸,其中該多核苷酸是RNA。

4、權利要求2的多核苷酸,含有如SEQ?ID?NO:1所示的核酸序列。

5、權利要求2的可復制的DNA,含有

(ⅰ)如SEQ?ID?NO:1所示的核苷酸序列,或

(ⅱ)在遺傳密碼簡并范圍內相應于的(ⅰ)序列的至少一個序列,或

(ⅲ)與互補于(ⅰ)或(ⅱ)序列的序列雜交的至少一個序列,和任選地

(ⅳ)(ⅰ)中有功能的中性有義突變。

6、權利要求2的多核苷酸序列,其編碼含有示于SEQ?ID?NO:2的氨基酸序列的多肽。

7、發酵生產L-氨基酸特別是L-賴氨酸的方法,其特征在于進行以下步驟:

(a)發酵生產L-氨基酸的棒狀細菌,該細菌中至少pfkA基因或其編碼核苷酸序列是擴增的,特別是過表達的,

(b)在培養基或細菌細胞中積累L-氨基酸,及

(c)分離L-氨基酸。

8、權利要求7的方法,特征在于所用細菌中所需的L-氨基酸生物合成途徑的其它基因是額外擴增的。

9、權利要求7的方法,其特征在于所用細菌中降低L-賴氨酸生成的代謝途徑至少被部分抑制。

10、權利要求7的方法,其特征在于使用經質粒載體轉化的菌株,且此質粒載體攜帶編碼pfkA基因的核苷酸序列。

11、權利要求7-10任一項的方法,其特征在于使用產生L-賴氨酸的棒狀細菌。

12、權利要求6的方法,其特征在于發酵這樣的細菌生產賴氨酸,所述細菌中選自如下一組的一或多個基因同時擴增,特別是過表達:

12.1編碼二氫-2,6-吡啶二羧酸合酶的dapA基因,

12.2編碼丙酮酸羧化酶的pyc基因,

12.3編碼三糖磷酸異構酶的tpi基因,

12.4編碼琥珀酰二氨基庚二酸脫琥珀?;傅膁apE基因,

12.5編碼甘油醛-3-磷酸脫氫酶的gap基因,

12.6編碼3-磷酸甘油激酶的pgk基因,

12.7編碼賴氨酸輸出蛋白的lysE基因。

13、權利要求9的方法,其特征在于發酵這樣的細菌生產賴氨酸,所述細菌中選自如下一組的一或多個基因同時弱化:

13.1編碼烯醇丙酮酸磷酸羧激酶的pck基因,

13.2編碼葡萄糖-6-磷酸異構酶的pgi基因。

14、前述一或多條權利要求的方法,其特征在于使用谷氨酸棒桿菌的微生物。

15、權利要求1的多核苷酸序列作為經聚合酶鏈反應產生編碼果糖磷酸激酶的基因的DNA的引物的應用。

16、權利要求1的多核苷酸序列作為雜交探針的應用。

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