[發(fā)明專利]一種殼聚糖親和蛋白、酶的固定化方法及生物材料有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202210519254.9 | 申請(qǐng)日： | 2022-05-12 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN114908071B | 公開（公告）日： | 2023-10-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李子杰;高曉冬;李婉杰;許向陽;宋在偉 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué);棗莊市杰諾生物酶有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N9/24 | 分類號(hào)： | C12N9/24;C12N15/56;C12N15/70;C12N15/81;C12N3/00;C12N11/16;C12R1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 南京禹為知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32272 | 代理人： | 康偉 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 聚糖 親和 蛋白 固定 方法 生物 材料 | ||
1.一種殼聚糖親和蛋白，其特征在于：所述殼聚糖親和蛋白為由核苷酸序列SEQ IDNO.1編碼的殼聚糖酶經(jīng)過其氨基酸第54位定點(diǎn)突變而產(chǎn)生的突變體，所述突變體為殼聚糖酶的突變體E54Q。
2.如權(quán)利要求1所述的殼聚糖親和蛋白，其特征在于：所述核苷酸序列SEQ ID NO.1編碼的殼聚糖酶來源于Bacillus subtilis 168。
3.一種DNA分子，其特征在于：所述DNA分子編碼如權(quán)利要求1所述的殼聚糖親和蛋白。
4.一種質(zhì)粒載體，其特征在于：所述質(zhì)粒載體裝載了如權(quán)利要求3所述的DNA分子。
5.如權(quán)利要求4所述的質(zhì)粒載體，其特征在于：所述質(zhì)粒載體為大腸桿菌質(zhì)粒pET-28a或釀酒酵母質(zhì)粒pRS426。
6.一種酶的固定化方法，其特征在于：包括，
將目的酶基因構(gòu)建在含有如權(quán)利要求1所述的殼聚糖親和蛋白的表達(dá)質(zhì)粒中，得到重組質(zhì)粒；
將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到釀酒酵母缺陷型菌株dit1Δ中，得到酵母菌株；
對(duì)得到的酵母菌株利用二倍體酵母誘導(dǎo)產(chǎn)孢得到孢子固定化目的酶。
7.如權(quán)利要求6所述的酶的固定化方法，其特征在于：所述目的酶基因?yàn)棣?半乳糖苷酶基因或β-木糖苷酶基因。
8.如權(quán)利要求6或7所述的酶的固定化方法，其特征在于：所述表達(dá)質(zhì)粒為釀酒酵母質(zhì)粒pRS426。
9.如權(quán)利要求8所述的酶的固定化方法，其特征在于：還包括對(duì)誘導(dǎo)產(chǎn)孢后的孢子進(jìn)行純化的方法。
10.一種生物材料，其特征在于：所述生物材料為裝載有目的酶和編碼如權(quán)利要求1所述的殼聚糖親和蛋白的DNA分子的釀酒酵母孢子；
所述釀酒酵母孢子為釀酒酵母缺陷型菌株dit1Δ的孢子。
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