[發明專利]牛源大腸桿菌檢測引物探針組合、試劑盒及應用有效
| 申請號： | 202110653313.7 | 申請日： | 2021-06-11 |
| 公開（公告）號： | CN113249504B | 公開（公告）日： | 2023-04-11 |
| 發明（設計）人： | 徐曉靜;權璞宏;王建龍;謝夢圓;關平原;周偉光;李文豪;張志丹;劉平平 | 申請（專利權）人： | 內蒙古農業大學;內蒙古自治區動物疫病預防控制中心（內蒙古自治區獸藥檢驗中心） |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 010018 內蒙古自*** | 國省代碼： | 內蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 大腸桿菌 檢測 引物 探針 組合 試劑盒 應用 | ||
本發明公開了牛源大腸桿菌檢測引物探針組合、試劑盒及應用。屬于病原菌檢測技術領域。牛源大腸桿菌檢測引物探針組合包括用于檢測菌毛抗原F5基因的引物探針和用于檢測菌毛抗原F41基因的引物探針。利用本發明可牛源大腸桿菌檢測引物探針組合同時實現大腸桿菌菌毛抗原F5基因和檢測菌毛抗原F41基因的檢測，檢測靈敏度高、特異性強、重復性好，適于推廣應用。
技術領域
本發明屬于病原菌檢測技術領域，具體涉及牛源大腸桿菌檢測引物探針組合、試劑盒及應用。
背景技術
致病性大腸桿菌可引起牛及其他動物的水樣腹瀉，嚴重情況甚至導致病畜死亡，造成巨大的經濟損失；在致病性大腸桿菌侵染病畜的過程中，菌毛能夠黏附牛小腸絨毛特異性受體上，釋放腸道毒素，并且可保護致病性大腸桿菌免受腸道消化酶的影響。致病性大腸桿菌具有多種菌毛類型，其中，F5、F41較為流行，鑒定菌毛類型有助于更有針對性地對病畜感染的大腸桿菌進行防治。
目前，研究人員已根據F5、F41研究出利用PCR對大腸桿菌的鑒定方法，然而，針對不同的菌毛類型，需要分別進行PCR檢測，并且檢測靈敏度低、特異性差。
因此，如何提供一種針對于F5、F41檢測靈敏度高、特異性強的牛源大腸桿菌檢測產品是本領域亟待解決的問題。
發明內容
本發明公開了牛源大腸桿菌檢測引物探針組合、試劑盒及應用。
為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：
牛源大腸桿菌檢測引物探針組合，
包括用于檢測菌毛抗原F5基因的引物探針和用于檢測菌毛抗原F41基因的引物探針；
用于檢測菌毛抗原F5基因的引物探針包括：
上游引物Forward?F5：5’-GGTCAATGGTAATCGTACATCAAC-3’，SEQ?ID?NO:1；
下游引物Reverse?F5：5’-ACTGTTCATAGAACCAGACCAG-3’，SEQ?ID?NO:2；
探針Probe?F5：5’CY5-CTTGGGCAGGCTGCTATTAGTGGTCATG-3’BHQ3，SEQ?ID?NO:3；
用于檢測菌毛抗原F41基因的引物探針包括：
上游引物Forward?F41：5’-TACTGAGCTAGGGACTCTT-3’，SEQ?ID?NO:4；
下游引物Reverse?F41：5’-CTGGATTAACAAGCCCTTCA-3’，SEQ?ID?NO:5；
探針Probe?F41：5’ROX-TCATTTGGTGCGGCAGTTGCAACTATT-3’BHQ2，SEQ?ID?NO:6。
上述牛源大腸桿菌檢測引物探針組合在制備檢測牛源大腸桿菌的產品中的應用。
牛源大腸桿菌檢測試劑盒，包括上述牛源大腸桿菌檢測引物探針組合。
上述牛源大腸桿菌檢測試劑盒使用時的檢測體系為25μL：
Premix?Ex?Taq?12.5μL，
10μM?Forward?F50.2μL，
10μM?Reverse?F50.2μL，
10μM?Probe?F50.6μL，
10μM?Forward?F411μL，
10μM?Reverse?F411μL，
10μM?Probe?F410.2μL，
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