[發明專利]抗新型冠狀病毒疫苗及其制備方法有效
| 申請號： | 202110576082.4 | 申請日： | 2021-05-26 |
| 公開（公告）號： | CN113117069B | 公開（公告）日： | 2022-09-30 |
| 發明（設計）人： | 蔣俊;林耀新;楊超;王茜婷;林鑫;文高柳;栗世鈾;王浩 | 申請（專利權）人： | 北京啟辰生生物科技有限公司;啟辰生生物科技（珠海）有限公司 |
| 主分類號： | A61K39/215 | 分類號： | A61K39/215;A61P31/14;C07K19/00;A61K9/127;A61K9/51;A61K47/24 |
| 代理公司： | 北京北匯律師事務所 11711 | 代理人： | 高元吉 |
| 地址： | 100176 北京市北京經濟技術*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 新型 冠狀病毒 疫苗 及其 制備 方法 | ||
1.一種抗新型冠狀病毒疫苗，其特征在于，其為由脂質外層和核糖核酸分子內核構成的納米顆粒結構，所述脂質外層由脂質體構成，所述核糖核酸分子包括用于編碼產生靶向溶酶體的第一抗原的mRNA、用于編碼產生靶向胞質的第二抗原的mRNA以及用于編碼產生外分泌的靶向B細胞的第三抗原的mRNA，其中mRNA由SEQ ID No:1-3所示的編碼核酸序列優化后經轉錄得到；并且所述第一抗原的氨基酸序列為SEQ ID No:4，所述第二抗原的氨基酸序列為SEQ ID No:5以及所述第三抗原的氨基酸序列為SEQ ID No:6。
2.根據權利要求1所述的抗新型冠狀病毒疫苗，其特征在于，所述脂質體包括DOTAP、DOPE、Choi和DSPE-PEG2000，其摩爾比為30-50:10-20:30-48.5:1.5-5。
3.根據權利要求1所述的抗新型冠狀病毒疫苗，其特征在于，脂質體與總mRNA的質量比為8-12:1。
4.一種用于制備抗新型冠狀病毒疫苗的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)取DOTAP、DOPE、Choi和DSPE-PEG2000分別溶于無水乙醇制得母液；
(2)以使得DOTAP、DOPE、Choi和DSPE-PEG2000的摩爾比為30-50:10-20:30-48.5:1.5-5的量將制得的各母液混合，得到脂質體混合溶液；
(3) 將脂質體混合溶液緩慢滴注到mRNA水溶液中，使有機相與水相的比例為1:1-1:20，攪拌15-180分鐘，得到納米顆粒懸浮液，其中mRNA包含用于編碼產生靶向溶酶體的第一抗原的mRNA、用于編碼產生靶向胞質的第二抗原的mRNA以及編碼產生外分泌的靶向B細胞的第三抗原的mRNA，其中mRNA由SEQ ID No:1-3所示的編碼核酸序列優化后經轉錄得到，所述第一抗原的氨基酸序列為SEQ ID No:4，所述第二抗原的氨基酸序列為SEQ ID No:5，所述第三抗原的氨基酸序列為SEQ ID No:6；
(4) 將所得納米顆粒懸浮液經超濾離心過濾濃縮，然后用含高深度蔗糖的PBS將濃縮液稀釋，即得納米顆粒狀抗新型冠狀病毒疫苗。
5.根據權利要求4所述的用于制備抗新型冠狀病毒疫苗的方法，其特征在于，進一步包括將納米顆粒狀抗新型冠狀病毒疫苗進行冷凍干燥制得干粉劑的步驟。
6.一種用于將mRNA遞送至體外目標細胞的方法，其特征在于，包括使納米顆粒與體外目標細胞接觸的步驟；
其中，所述納米顆粒由脂質外層和核糖核酸分子內核構成，所述脂質外層由DOTAP、DOPE、Choi和DSPE-PEG2000構成，所述核糖核酸分子包含用于編碼產生第一抗原的mRNA、用于編碼產生第二抗原的mRNA以及編碼產生外分泌的靶向B細胞的第三抗原的mRNA，所述第一抗原含有LAMP蛋白或其片段，第二抗原含有FKBP12或其片段，其中mRNA由SEQ ID No:1-3所示的編碼核酸序列優化后經轉錄得到，所述第一抗原的氨基酸序列為SEQ ID No:4，所述第二抗原的氨基酸序列為SEQ ID No:5，所述第三抗原的氨基酸序列為SEQ ID No:6。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，DOTAP、DOPE、Choi和DSPE-PEG2000的摩爾比為30-50:10-20:30-48.5:1.5-5。
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