本發明公開了一種氨基酸的分離提純方法，所述方法包括如下步驟：將水和0.1％TFA的離子對溶液按一定比例配置流動相A；將乙腈和0.1％TFA的離子對溶液按一定比例配置流動相B；注入氨基酸溶液，以流動相A和流動相B對色譜柱進行梯度洗脫，洗脫完成后記錄色譜圖，并采用面積歸一化法計算氨基酸的純度，該方法，檢測速度與現有技術相比更加快，結果更準確，方法步驟簡單，便于操作，具有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明涉及氨基酸的提純技術領域，具體涉及一種氨基酸的分離提純方法。

背景技術：

L-亮氨酸(L-Leucine)是人體必須的八種氨基酸之一，屬于二十種蛋白質氨基酸內的脂肪族類氨基酸，與L-異亮氨酸和L-纈氨酸共稱三大支鏈氨基酸，化學式為C₆H₁₃NO₂，與D-亮氨酸是對映異構體，室溫下為白色有光澤六面體結晶或白色結晶性粉末。無臭，略有苦味。在烴類存在下，在無機酸水溶液中性能穩定。微溶于乙醇(0.07％)，溶于稀鹽酸和堿性氫氧化物和碳酸鹽溶液。不溶于乙醚。

亮氨酸與異亮氨酸是同系的同分異構體，結構上亮氨酸與異亮氨酸的碳主鏈相同，前者的γ位有個甲基，后者β位有個甲基。亮氨酸與異亮氨酸是結構差異很小的同分異構體氨基酸。因此Fmoc-Leu-OH的有關物質之一Fmoc-Ile-OH分離難度尤其大。

如中國專利ZL201310325212.2公開了一種反相分離衍生化亮氨酸和異亮氨酸的方法，在該專利中雖然樣品能夠分離，但Fmoc-Leu-OH與Fmoc-Ile-OH出峰時間均在40分鐘左右，色譜分析時間長，且分離度小于1.5。

發明內容

本發明的目的在于提供一種氨基酸的分離提純方法，以解決現有技術中氨基酸分離時出峰時間長，且分離度低的缺陷。

一種氨基酸的分離提純方法，所述方法包括如下步驟：

將水和0.1％TFA的離子對溶液按一定比例配置流動相A；

將乙腈和0.1％TFA的離子對溶液按一定比例配置流動相B；

注入氨基酸溶液，以流動相A和流動相B對色譜柱進行梯度洗脫，洗脫條件為：

0min，流動相B的體積變化為40～100；

20min，流動相B的體積變化為40～100；

25min，流動相B的體積變化為80～100；

29min，流動相B的體積變化為80～100；

30min，流動相B的體積變化為40～100；

35min，流動相B的體積為40～100；

記錄色譜圖，并采用面積歸一化法計算氨基酸的純度。

進一步的，所述氨基酸溶液包括Fmoc-Leu-OH的混合溶液或Fmoc-Ile-OH的混合溶液中的一種或兩種混合的溶液。

進一步的，所述0.1％TFA的離子對溶液的體積含量為0.05～1.2％、乙腈的體積含量為20～90％，水的體積含量為體積含量為10～80％。

進一步的，所述色譜柱包括C4色譜柱、C12色譜柱以及C18色譜柱中的一種。

進一步的，洗脫時的色譜柱的柱溫為22～45℃。

進一步的，洗脫的進樣濃度控制在0.4～1.0mg/min。

進一步的，洗脫時紫外線檢測器的檢測波長為210～280nm。

進一步的，洗脫時流動相流速為0.6～1.2ml/min。