本發明公開一種甘露糖酶基因VbMan26A、重組質粒、重組菌株、甘露糖酶及其應用，其中，所述甘露糖酶基因VbMan26A用于編碼甘露糖酶，所述甘露糖酶基因VbMan26A的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，編碼所得的甘露糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本發明提供的甘露糖酶基因VbMan26A，由其編碼所得甘露糖酶在的低溫和堿性條件下均具有高活性，能夠有效的將甘露聚糖水解為2～3個殘基的甘露寡糖，可適用于制備益生素甘露寡糖，也可用于制備洗滌用品。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，具體涉及一種甘露糖酶基因VbMan26A、重組質粒、重組菌株、甘露糖酶及其應用。

背景技術

半纖維素是自然界中第二大豐富的碳水化合物，其主要存在于植物細胞壁中。半纖維素具有多種存在形式，主要有木聚糖、阿拉伯木聚糖、葡萄糖甘露聚糖、半乳葡萄甘露聚糖等。內切型甘露糖酶是最為重要的一種(內切型甘露糖酶通常被稱為甘露糖酶)降解甘露聚糖的酶類。甘露糖酶隨機切割甘露聚糖主鏈上的β-1,4糖苷鍵，將甘露聚糖水解為甘露寡糖。甘露糖酶在半纖維多聚糖資源的利用及工業應用方面有巨大潛力。

由于蛋白質序列的差異，來自不同微生物的甘露糖酶往往具有不同的酶學性質，例如，不同的反應溫度和pH，不一樣的溫度、酸堿度以及鹽度的耐受性，以及不同的產物類型(產物為不同長度的甘露寡糖)等，但是在低溫、堿性下具有高活性的甘露糖酶較為少見。

發明內容

本發明的主要目的是提出一種甘露糖酶基因VbMan26A、重組質粒、重組菌株、甘露糖酶及其應用，旨在提供一種在低溫、堿性下具有高活性的甘露糖酶。

為實現上述目的，本發明提出一種甘露糖酶基因VbMan26A，用于編碼甘露糖酶，所述甘露糖酶基因VbMan26A的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本發明還提出一種甘露糖酶，所述甘露糖酶由如上所述的甘露糖酶基因VbMan26A編碼所得，且所述甘露糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本發明還提出一種重組質粒，所述重組質粒包括如上所述的甘露糖酶基因VbMan26A。

可選地，所述重組質粒還包括表達載體pET-28a。

本發明還提出一種重組菌株，所述重組菌株包括如上所述的甘露糖酶基因VbMan26A。

可選地，所述重組菌株的宿主細胞為大腸桿菌。

進一步地，本發明還提出一種制備益生素甘露寡糖的方法，包括以下步驟：采用如上所述的甘露糖酶水解甘露聚糖，得到益生素甘露寡糖。

可選地，所述甘露聚糖包括魔芋精粉、刺槐豆膠和象牙果甘露糖中的任意一種。

更進一步地，本發明還提出一種如上所述的甘露糖酶在制備洗滌用品中的應用。

本發明提供的甘露糖酶基因VbMan26A，由其編碼所得甘露糖酶在的低溫和堿性條件下均具有高活性，能夠有效的將甘露聚糖水解為2～3個殘基的甘露寡糖，可適用于制備益生素甘露寡糖，也可用于制備洗滌用品。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅為本發明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。

圖1為實施例4制備的甘露糖酶中，甘露糖酶基因VbMan26A的蛋白表達分析結果圖；

圖2為實施例4制備的甘露糖酶在不同pH值條件下的相對酶活；

圖3為實施例4制備的甘露糖酶的pH穩定性分析結果圖；