[發明專利]將誘導多能干細胞定向分化為內耳毛細胞樣細胞的方法有效
| 申請號： | 202110251574.6 | 申請日： | 2021-03-08 |
| 公開（公告）號： | CN112852715B | 公開（公告）日： | 2023-03-28 |
| 發明（設計）人： | 管敏鑫;陳潮;冀延春;孟飛龍 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 杭州求是專利事務所有限公司 33200 | 代理人： | 趙杭麗 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 誘導 多能 干細胞 定向 化為 內耳 細胞 方法 | ||
1.一種誘導多能干細胞定向分化方法在獲得內耳毛細胞樣細胞中的應用，其特征在于，通過以下步驟實現：
（1）將iPSC接種至Laminin包被的培養板，使用內耳祖細胞培養基培養10-12天，所述祖細胞培養基是在DMEM/F12培養基中添加體積百分比為1%的 N2 supplement，2%的B27supplement，500×的0.2%的Normocin，終濃度為1mmol/L的丙酮酸鈉，50ng/mL的FGF3，50ng/mL的FGF10得到的培養基，培養條件均為37℃，5% CO2濕潤環境的恒溫培養箱；
（2）再將細胞接種至含滅活的雞胚橢圓囊細胞的明膠包被培養板，使用內耳毛細胞培養基培養14-28天，獲得成熟的內耳毛細胞樣細胞，所述內耳毛細胞培養基是由DMEM/F12培養基中添加體積百分比為1%的 N2 supplement，2%的B27 supplement，500×的0.2%的Normocin，終濃度為1mmol/L的丙酮酸鈉，1μmol/L的全反式維甲酸，20ng/mL的EGF得到的培養基；所述明膠包被培養板的方法為：在PBS溶液中添加質量體積分數為0.2%的明膠，高壓滅菌后，取適宜體積加入培養板覆蓋培養底面，37℃靜置0.5小時后棄去溶液。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，步驟（2）所述雞胚橢圓囊細胞滅活方法為，將雞胚橢圓囊細胞用添加終濃度為2μg/mL的絲裂霉素C的DMEM培養基培養3小時，PBS漂洗細胞，獲得滅活的雞胚橢圓囊細胞。
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