[發明專利]一種腦梗死生物標志物及其應用在審
| 申請號： | 202110200547.6 | 申請日： | 2021-02-23 |
| 公開（公告）號： | CN113063718A | 公開（公告）日： | 2021-07-02 |
| 發明（設計）人： | 鐘望濤;馬曉瑭;張慧婷;許小冰 | 申請（專利權）人： | 廣東醫科大學附屬醫院 |
| 主分類號： | G01N15/14 | 分類號： | G01N15/14 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201 | 代理人： | 潘俊達;王滔 |
| 地址： | 524000 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 腦梗死 生物 標志 及其 應用 | ||
1.一種腦梗死生物標志物，其特征在于，所述標志物為血漿內皮細胞膜微粒。
2.根據權利要求1所述的腦梗死生物標志物，其特征在于，所述血漿內皮細胞膜微粒的提取方法包括以下步驟：
S1、取出血漿置于無酶離心管中，按血漿：磷酸緩沖鹽溶液＝1:3的體積比將磷酸緩沖鹽溶液加入所述無酶離心管中混合，放入離心機中離心，離心后去除沉淀，得到去沉淀血漿；
S2、將步驟S1中得到的去沉淀血漿再次離心，離心后去掉上清液，再次加入磷酸緩沖鹽溶液混合均勻，得到預混合液；
S3、將內皮標記物CD105偶聯的生物素加入所述預混合液中，4℃放置2h，得到血漿內皮細胞膜微粒。
3.根據權利要求2所述的腦梗死生物標志物，其特征在于，步驟S1中，離心條件為：先在轉速300g/min下運行5min，然后在轉速2000g/min下運行20min，離心溫度為4℃。
4.根據權利要求3所述的腦梗死生物標志物，其特征在于，步驟S2中，離心條件為：在轉速20000g/min下運行70min，離心溫度為4℃。
5.根據權利要求4所述的腦梗死生物標志物，其特征在于，所述血漿內皮細胞膜微粒的分選方法包括以下步驟：
S1、將抗生物素多分選微珠加入得到的血漿內皮細胞膜微粒中，4℃放置15min，得到第一分選液；
S2、向所述第一分選液中加入磷酸緩沖鹽溶液，置于磁力架上，時間大于或等于8h；然后置于4℃下，去除上清液，得到微粒磁珠沉淀，再次加入磷酸緩沖鹽溶液重懸；得到第二分選液；
S3、將多分選釋放試劑加入所述第二分選液，混合均勻，4℃放置10min，得到第三分選液；
S4、將磷酸緩沖鹽溶液加入所述第三分選液中，置于磁力架上，時間大于或等于8h；然后置于4℃下，再加入內皮標志物CD144，4℃放置時間大于或等于8h，得到第二分選液；
S5、將發射波長為655nm標記的兔抗羊抗體加入所述第三分選液中，避光條件下4℃放置2h，得到分選出的血漿內皮細胞膜微粒。
6.一種權利要求1～5任一項所述的腦梗死生物標志物在超急性腦梗死rt-PA靜脈溶栓預后中的應用。
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