本發(fā)明公開了一種殼聚糖納米硒顆粒及其制備方法和在疫苗中的應用，其中所述殼聚糖納米硒通過殼聚糖和亞硒酸鈉等原料制備，其可實現(xiàn)對抗原和疫苗佐劑的高效包裹。該殼聚糖納米硒顆粒具有極好的生物安全性。該殼聚糖納米硒顆粒具有良好的物理穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性，適用于疫苗工業(yè)化制備。該殼聚糖納米硒顆粒作為免疫載體或佐劑，能夠促進抗原呈遞細胞對抗原的吞噬、處理和呈遞，誘導產(chǎn)生更高水平的抗原特異性IgG抗體效價，在疫苗開發(fā)領(lǐng)域具有重要的應用價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及疫苗研制技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種殼聚糖納米硒顆粒及其制備方法和在疫苗中的應用。

背景技術(shù)

疫苗的研發(fā)經(jīng)歷了數(shù)代技術(shù)的更新。減毒活疫苗和滅活疫苗被廣泛用于預防包括黃熱病、麻疹和脊髓灰質(zhì)炎在內(nèi)的嚴重病毒性疾病，但有培養(yǎng)困難、容易感染的缺點，且容易引起過激的免疫反應。亞單位疫苗，包括蛋白、多糖或其他病原體成分，如b型流感、白喉、破傷風、無細胞穿孔病、腦膜炎球菌和肺炎球菌等，但它們也需要佐劑來增強其免疫原性，并且在暴露于敵對的體內(nèi)環(huán)境后經(jīng)常出現(xiàn)早期降解的情況。核糖核酸或脫氧核糖核酸疫苗的感染風險極小，能夠引發(fā)針對特定病原體的免疫反應，而且成本不高；但面臨著分子的過早降解和不能轉(zhuǎn)化為功能性免疫原的問題。

為了克服上述提到的這些障礙，需要一種有效的疫苗遞送系統(tǒng)。采用納米技術(shù)開發(fā)新一代的復合疫苗是一個很好的選擇。基于納米載體的遞送系統(tǒng)可以保護疫苗免于過早降解，并且具有良好的佐劑特性，有助于將免疫原靶向遞送至抗原呈遞細胞(APCs)。疫苗抗原可以被包裹在納米載體中或修飾在它們的表面。納米粒子內(nèi)的封裝可以保護抗原免于過早的蛋白酶降解并可實現(xiàn)可持續(xù)的釋放，而表面吸附的抗原促進了它們與免疫細胞表面受體的相互作用，例如抗原提呈細胞的Toll-like受體(TLRs)。

殼聚糖具有良好的固有免疫和特異性免疫的刺激能力，并且能誘導黏膜免疫，對抗原有高效保護性，能增強抗原免疫原性。殼聚糖制備成納米顆粒可以作為疫苗載體精確負載抗原，靶向呈遞給免疫細胞，并能作為佐劑增強抗原的免疫原性。殼聚糖與傳統(tǒng)鋁佐劑、弗氏佐劑相比有更好的抗原保護效果。其巨大的分子量及復雜的空間結(jié)構(gòu)可以將抗原包裹其中，并且因攜帶大量正電荷故而有強有力的靜電作用保護疫苗在運輸過程中不易被酶解，疫苗結(jié)合殼聚糖會比直接裸露的疫苗有更強的穩(wěn)定性。

本發(fā)明初次嘗試了一種殼聚糖納米硒顆粒作為疫苗載體，通過吸附和包裹抗原，增強疫苗的淋巴結(jié)遞送，提高免疫效果。本發(fā)明所用的殼聚糖納米硒生物安全性較好，殼聚糖納米硒本身可以作為保健食品或食品添加劑成分應用于食品行業(yè)，而該殼聚糖納米硒顆粒能夠顯著提高抗原的免疫原性，適用于疫苗的開發(fā)。與殼聚糖納米顆粒相比，殼聚糖納米硒無需加入額外的交聯(lián)劑，通過硒還原反應形成納米硒顆粒，具有更好的生物安全性。本發(fā)明進行了一系列驗證和條件摸索，證實殼聚糖納米硒顆粒可以作為蛋白抗原的載體或佐劑，產(chǎn)生針對蛋白抗原的高免疫反應。這一策略提供了一種新型的疫苗載體，有效提高了抗原的免疫原性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個目的是提供一種負載抗原和疫苗佐劑的殼聚糖納米硒顆粒。

本發(fā)明的第二個目的是提供一種上述殼聚糖納米硒顆粒的制備方法。

本發(fā)明的第三個目的是提供一種上述殼聚糖納米硒顆粒作為抗原載體或疫苗佐劑的應用。

本發(fā)明的第四個目的是提供一種上述殼聚糖納米硒顆粒在制備抗腫瘤藥物中的應用。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

本發(fā)明的第一個方面提供了一種負載抗原和疫苗佐劑的殼聚糖納米硒顆粒，利用帶正電荷的殼聚糖，與亞硒酸鈉還原反應形成殼聚糖納米硒顆粒，所述殼聚糖納米硒顆粒呈球形，具有實心的球核，粒徑范圍在20～200nm。

進一步地，所述殼聚糖納米硒顆粒的PDI為0.1～0.4，Zeta電位為15～40mV。