[發(fā)明專利]一種重組畢赤酵母基因工程菌及其構(gòu)建方法與在產(chǎn)木聚糖酶中的應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110029601.5 | 申請日: | 2021-01-11 |
| 公開(公告)號: | CN112592844B | 公開(公告)日: | 2023-08-18 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 應(yīng)漢杰;牛歡青;宋佳睿;閔志迪;陳勇;劉慶國;柳東 | 申請(專利權(quán))人: | 南京工業(yè)大學(xué) |
| 主分類號: | C12N1/19 | 分類號: | C12N1/19;C12N15/81;C12N9/24;C12R1/84 |
| 代理公司: | 江蘇圣典律師事務(wù)所 32237 | 代理人: | 肖明芳 |
| 地址: | 211816 江*** | 國省代碼: | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 重組 酵母 基因工程 及其 構(gòu)建 方法 聚糖 中的 應(yīng)用 | ||
1.一種重組畢赤酵母基因工程菌在產(chǎn)木聚糖酶中的應(yīng)用,其特征在于,所述重組畢赤酵母基因工程菌為在所述畢赤酵母菌中過表達(dá)凝集素蛋白基因LMAN2;所述畢赤酵母為Pichia?Pastoris?GS115;所述凝集素蛋白基因LMAN2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用,其特征在于,所述重組畢赤酵母基因工程菌的構(gòu)建方法包括以下步驟:
(1)以畢赤酵母基因組為模板,PCR擴(kuò)增LMAN2基因片段;
(2)將步驟(1)獲得的LMAN2基因片段克隆到表達(dá)質(zhì)粒上,得到重組質(zhì)粒;
(3)將步驟(2)獲得的重組質(zhì)粒線性化后導(dǎo)入畢赤酵母菌中,篩選得到重組畢赤酵母基因工程菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用,其特征在于,所述重組畢赤酵母基因工程菌通過游離發(fā)酵的方式產(chǎn)木聚糖酶。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用,其特征在于,所述重組畢赤酵母基因工程菌通過固定發(fā)酵的方式產(chǎn)木聚糖酶。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用,其特征在于,所述重組畢赤酵母基因工程菌通過固定化連續(xù)發(fā)酵的方式產(chǎn)木聚糖酶。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的應(yīng)用,其特征在于,固定化載體的用量為2-80g/L發(fā)酵培養(yǎng)基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用,其特征在于,所述產(chǎn)木聚糖酶的發(fā)酵培養(yǎng)基中,各組分的濃度為:蛋白胨10-30g/L、酵母粉5-15g/L、無氨基酵母氮源10-20g/L、磷酸氫二鉀0.1-1g/L、磷酸二氫鉀1-5g/L、生物素0.1-5mg/L。
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