本實(shí)用新型屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種雞ALKBH5基因熒光定量RT?PCR試劑盒，包括盒體、蓋體，盒體內(nèi)設(shè)有SYBR Green Master熱啟動熒光PCR混合物、雞ALKBH5基因表達(dá)的特異性正反向引物、雞內(nèi)參基因GAPDH表達(dá)的特異性正反向引物、ROX染料、滅菌DEPC水、Dilution buffer。本實(shí)用新型試劑盒通過實(shí)時(shí)熒光定量RT?PCR技術(shù)檢測雞ALKBH5基因表達(dá)。

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及雞ALKBH5基因表達(dá)熒光定量RT-PCR試劑盒及檢測方法，主要用于雞ALKBH5基因在肌肉和肝臟代謝、生長、分化中的作用機(jī)理研究。

背景技術(shù)

表觀遺傳學(xué)是指在基因序列不發(fā)生變化的情況下，基因的表達(dá)水平發(fā)生改變，如DNA、 RNA和蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾都是表觀遺傳學(xué)重要的研究內(nèi)容，近年來，隨著科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，基于DNA和蛋白質(zhì)修飾研究基礎(chǔ)，RNA甲基化研究在表觀遺傳領(lǐng)域已成為前沿的研究熱點(diǎn)。在眾多的RNA化學(xué)修飾中，RNA甲基化修飾約占所有RNA修飾的60％以上，其中N-甲基腺嘌呤(N6－methyladenosine，m6A)是真核生物mRNA和lncRNAs最常見轉(zhuǎn)錄后修飾，近年來以m6 A為主的RNA甲基化修飾研究表明，m6A與基因表達(dá)調(diào)控以及RNA 的轉(zhuǎn)錄、翻譯、剪切、降解、核轉(zhuǎn)運(yùn)等方面密切相關(guān)。m6A甲基化的形成需借助甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用將甲基供體SAM提供的－CH3轉(zhuǎn)移到RNA分子特定的腺嘌呤上，去甲基化需要去甲基化酶和結(jié)合蛋白質(zhì)的作用脫去－CH3而實(shí)現(xiàn)。m6A甲基化修飾在細(xì)胞內(nèi)是動態(tài)的可逆的修飾過程。

ALKBH5基因主要參與m6A甲基化修飾的去甲基化過程。研究發(fā)現(xiàn)，ALKBH5基因在小鼠睪丸中的表達(dá)水平最高，敲除后會導(dǎo)致m6A水平上升，導(dǎo)致精子形態(tài)發(fā)生異常，睪丸體積變小以及一系列的生殖功能障。在小鼠小腦發(fā)育過程中，Alkbh5基因的缺失會導(dǎo)致不同細(xì)胞中的關(guān)鍵基因m6A修飾發(fā)生紊亂，導(dǎo)致小腦細(xì)胞增殖和分化異常。在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干樣細(xì)胞(GSCs)中，沉默ALKBH5的表達(dá)可抑制GSCs的增殖。在人上皮性卵巢癌組織中ALKBH5 的表達(dá)與正常卵巢組織相比，顯著增加。以上的這些研究，大多數(shù)是以人或小鼠為模型，共同揭示了ALKBH5在調(diào)控動物繁殖、組織生長發(fā)育中具有重要作用，在一些重要的經(jīng)濟(jì)動物，如雞上的研究均相對較少。在現(xiàn)代規(guī)模化養(yǎng)殖生產(chǎn)中，提高動物的生產(chǎn)性能和繁殖性能對于提高經(jīng)濟(jì)效益極為重要，因此就可以從RNA甲基化修飾的分子調(diào)控機(jī)制研究入手，進(jìn)而通過有效的改變RNA分子甲基化修飾的水平來影響雞的生產(chǎn)性能，產(chǎn)生更多的經(jīng)濟(jì)效益。

實(shí)用新型內(nèi)容

為了解決以上技術(shù)問題，本實(shí)用新型提供一種雞ALKBH5基因表達(dá)熒光定量RT-PCR檢測試劑盒，本實(shí)用新型試劑盒通過實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測雞ALKBH5基因表達(dá)，為研究雞ALKBH5表達(dá)調(diào)控以及生長發(fā)育調(diào)控奠定基礎(chǔ)，為優(yōu)質(zhì)雞育種提供理論依據(jù)，具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

本實(shí)用新型的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，雞ALKBH5基因熒光定量RT-PCR試劑盒，包括盒體和蓋體，盒體內(nèi)設(shè)有襯墊，襯墊上設(shè)有容納腔，其特征是，所述容納腔中分別設(shè)置SYBR Green Master熱啟動熒光PCR混合物、雞ALKBH5基因表達(dá)的特異性正反向引物、雞內(nèi)參基因GAPDH表達(dá)的特異性正反向引物、ROX染料、滅菌DEPC水、稀釋緩沖液 Dilutionbuffer。

其中，雞ALKBH5基因正反向引物序列為：

F:5，—TCGTTCTTCAGCGATTCGGC—3，

R:5，—TCGGCTGCGTATCCACTGAG—3；

以及雞內(nèi)參基因GAPDH表達(dá)的特異性正反向引物序列為:

F:5，—CGATCTGAACTACATGGTTTAC—3，

R:5,—TCTGCCCATTTGATGTTGC—3。