本發明提供了CD19和CD20雙靶點嵌合抗原受體及其應用，所述嵌合抗原受體包括抗原結合結構域、跨膜結構域和信號轉導結構域；所述抗原結合結構域包括抗CD19單鏈抗體和抗CD20單鏈抗體。本發明的抗CD19和CD20雙靶點嵌合抗原受體對CD19陽性和/或CD20陽性細胞具有靶向活性，表達抗CD19和CD20雙靶點嵌合抗原受體的T細胞對CD19抗原表達量少或不表達的腫瘤細胞、CD20抗原表達量少或不表達的腫瘤細胞均具有殺傷作用，有利于避免免疫逃逸現象，降低了疾病復發的可能性。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，涉及CD19和CD20雙靶點嵌合抗原受體及其應用。

背景技術

近年來，隨著腫瘤免疫學理論和臨床技術的發展，嵌合抗原受體T細胞療法(Chimeric?antigen?receptor?T-cell?immunotherapy，CAR-T)成為最有發展前景的腫瘤免疫療法之一。嵌合抗原受體(chimeric?antigen?receptor，CAR)由腫瘤相關抗原結合區、胞外鉸鏈區、跨膜區以及胞內信號轉導區組成。通常，CAR分子包含的抗體單鏈片段可變區(single?chain?fragment?variable，scFv)對腫瘤相關抗原(tumor?associated?antigen，TAA)具有特異性結合作用，其通過鉸鏈和跨膜區與信號傳導分子的胞質結構域偶聯。

目前，CAR-T細胞療法已經廣泛應用于治療B細胞惡性腫瘤，靶向CD19的CAR-T細胞是CAR-T療法治療B細胞惡性腫瘤的先驅，為治療B細胞惡性腫瘤提供了有效方案。然而，醫學診斷表明，很多腫瘤細胞并不表達專一、特異的腫瘤抗原。例如，某些血液腫瘤中的腫瘤細胞并不表達CD19分子，而表達CD20分子，僅利用靶向CD19分子的CAR-T細胞治療效果不佳，一段時間后部分患者出現了腫瘤復發現象。腫瘤異質性已成為阻礙細胞療法應用于實體腫瘤治療的一大障礙。

因此，有必要開發雙靶向CD19和CD20分子的嵌合抗原受體，提高CAR-T細胞對腫瘤細胞的靶向和清除作用。

發明內容

針對現有技術的不足和實際需求，本發明提供了CD19和CD20雙靶點嵌合抗原受體及其應用，所述嵌合抗原受體可以同時靶向CD19和CD20分子，在治療血液惡性疾病方面具有廣闊的前景。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供了一種CD19和CD20雙靶點嵌合抗原受體，所述嵌合抗原受體包括抗原結合結構域、跨膜結構域和信號轉導結構域；

所述抗原結合結構域包括抗CD19單鏈抗體和抗CD20單鏈抗體。

本發明中，與單靶點嵌合抗原受體相比，抗CD19和CD20雙靶點嵌合抗原受體對CD19陽性和/或CD20陽性細胞具有更強的靶向活性，對CD19抗原表達量少或不表達的腫瘤細胞、CD20抗原表達量少或不表達的腫瘤細胞均具有高效的靶向作用，有利于避免免疫逃逸現象。

優選地，所述抗CD19單鏈抗體包括SEQ?ID?NO:1所示的氨基酸序列；

SEQ?ID?NO:1：

DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPPRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSAYTFGQGTKLEIKSGGGGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRHGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNQYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLDLQMNSLRVEDTAVYYCARRSITWYGGFDIWGQGTMVTVSSAQTTAPSVYPLAP。

優選地，所述抗CD20單鏈抗體包括SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列；

SEQ?ID?NO:2：