本發(fā)明提供了一種編碼CAR基因的mRNA、組合mRNA、構(gòu)建方法、CAR?T細(xì)胞和應(yīng)用，屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，所述mRNA的核苷酸序列選自SEQ?ID?No.1～4中的任一種；所述的編碼CAR基因的mRNA和編碼細(xì)胞因子的mRNA，所述編碼細(xì)胞因子的mRNA的核苷酸序列選自SEQ?ID?No.5～9中的一種或幾種。采用本發(fā)明提供的編碼CAR基因的mRNA、組合mRNA構(gòu)建得到的CAR?T細(xì)胞能夠表達(dá)CAR基因，對腫瘤具有殺傷作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種編碼CAR基因的mRNA、組合mRNA、構(gòu)建方法、CAR-T細(xì)胞和應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著全球環(huán)境因素的不斷惡化，無論發(fā)達(dá)國家還是發(fā)展中國家，惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢，惡性腫瘤已成為人類生命健康的最大危害。由于傳統(tǒng)治療方法的固有缺陷以及全球生物高新技術(shù)的火熱發(fā)展，人們對新療法的出現(xiàn)期待已久。而生物治療作為剛嶄露頭角的全新治療理念，其特有優(yōu)點(diǎn)包括選擇性靶向殺傷腫瘤細(xì)胞，對正常細(xì)胞無毒性作用。生物療法治療癌癥能夠明顯改善患者臨床癥狀，提高生活質(zhì)量，延長生存期。生物療法治療癌癥能激活機(jī)體免疫功能，有望根除腫瘤細(xì)胞，生物治療能夠增強(qiáng)手術(shù)成功率，必將為癌癥患者所廣泛接受。

CAR-T療法是一種以嵌合型抗原受體為基礎(chǔ)的細(xì)胞免疫治療方案。其通過體外基因轉(zhuǎn)移技術(shù)，將編碼嵌合抗原受體(CAR)的基因序列轉(zhuǎn)導(dǎo)入T細(xì)胞中，生成可以結(jié)合靶抗原的腫瘤特異性T細(xì)胞。近幾年，CAR-T療法在治療惡性血液腫瘤中取得的成果是有目共睹的，如針對難治性/復(fù)發(fā)性急性B淋巴母細(xì)胞白血病的Kymriah和針對難治性/復(fù)發(fā)性非何杰金氏淋巴瘤的Yescarta去年已在美國上市，但會(huì)有至少50％以上的復(fù)發(fā)率，且CAR-T細(xì)胞治療實(shí)體瘤效果不佳，主要原因是缺乏合適的靶抗原、CAR-T細(xì)胞在體內(nèi)持續(xù)時(shí)間短、免疫逃逸、免疫抑制腫瘤微環(huán)境等。因此，目標(biāo)抗原的選擇對于CAR的特異性、有效性以及基因改造的T細(xì)胞自身安全性來講都至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種編碼CAR基因的mRNA、組合mRNA、構(gòu)建方法、CAR-T細(xì)胞和應(yīng)用，采用本發(fā)明提供的編碼CAR基因的mRNA和mRNA組合構(gòu)建得到的CAR-T細(xì)胞，能夠表達(dá)CAR基因，能夠殺傷腫瘤細(xì)胞。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種編碼CAR基因的mRNA，所述mRNA的核苷酸序列選自SEQ?ID?No.1～4中的任一種。

本發(fā)明還提供了一種防治腫瘤的組合mRNA，包括上述技術(shù)方案所述的編碼CAR基因的mRNA和編碼細(xì)胞因子的mRNA，所述編碼細(xì)胞因子的mRNA的核苷酸序列選自SEQ?IDNo.5～9中的一種或幾種。

優(yōu)選的，包括編碼CAR基因的mRNA和編碼細(xì)胞因子的mRNA，所述編碼CAR基因的mRNA的核苷酸序列如SEQ?ID?No.4所示，所述編碼細(xì)胞因子的mRNA的核苷酸序列如SEQ?IDNo.5所示。

優(yōu)選的，包括編碼CAR基因的mRNA和編碼細(xì)胞因子的mRNA，所述編碼CAR基因的mRNA的核苷酸序列如SEQ?ID?No.4所示，所述編碼細(xì)胞因子的mRNA的核苷酸序列如SEQ?IDNo.6所示。

優(yōu)選的，包括編碼CAR基因的mRNA和編碼細(xì)胞因子的mRNA，所述編碼CAR基因的mRNA的核苷酸序列如SEQ?ID?No.4所示，所述編碼細(xì)胞因子的mRNA的核苷酸序列如SEQ?IDNo.7和8所示。

優(yōu)選的，包括編碼CAR基因的mRNA和編碼細(xì)胞因子的mRNA，所述編碼CAR基因的mRNA的核苷酸序列如SEQ?ID?No.4所示，所述編碼細(xì)胞因子的mRNA的核苷酸序列如SEQ?IDNo.9所示。

本發(fā)明還提供了一種CAR-T細(xì)胞的構(gòu)建方法，包括以下步驟：將上述技術(shù)方案所述的編碼CAR基因的mRNA或上述技術(shù)方案所述的組合mRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞，得到CAR-T細(xì)胞。