本發(fā)明涉及miR?493?5p的檢測試劑在制備食管癌檢測試劑盒中的應(yīng)用及食管癌檢測試劑盒。本發(fā)明首次揭示了血漿外泌體中miR?493?5p與食管癌、食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，在食管癌、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中顯著降低且具有統(tǒng)計學(xué)意義。基于此，本發(fā)明將miR?493?5p的檢測試劑應(yīng)用于制備食管癌的檢測試劑盒，制備得到的試劑盒可以方便、快捷、特異性高的進行食管癌的早期診斷、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)警、以及判斷食管癌患者手術(shù)治療情況，為食管癌患者的治療提供指導(dǎo)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及miR-493-5p的檢測試劑在制備食管癌檢測試劑盒中的應(yīng)用及食管癌檢測試劑盒，屬于生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

食管癌作為消化道常見惡性腫瘤，其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)位居惡性腫瘤的第8位，死亡率位居第6位。我國是食管癌的高發(fā)地區(qū)，其中約90％為食管鱗癌。近年來，盡管食管癌診療技術(shù)得到提升，但其預(yù)后仍然較差，5年總體生存率僅為20％左右。由于食管癌早期癥狀的隱蔽性和非特異性，臨床上一經(jīng)診治，多數(shù)患者已屬中晚期。胃鏡檢查是目前食管癌確診的主要手段，但對患者的創(chuàng)傷較大，且對操作者技術(shù)要求較高，不適用于大規(guī)模的人群篩查。而上消化道鋇餐、CT等檢查，因其特異性較低，不能用于食管癌的確診。因此，目前迫切的需要一種較為敏感的標志物，為食管癌的早期診斷提供客觀依據(jù)。另一方面，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移作為食管癌患者預(yù)后的獨立危險因素，是預(yù)后不佳的主要原因之一。判斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的主要方法為影像學(xué)檢查，而一些患者術(shù)前CT檢查無明顯腫大的淋巴結(jié)，術(shù)后病理卻證實為淋巴結(jié)陽性。明確患者術(shù)前是否確實存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，指導(dǎo)術(shù)前新輔助化療，對于改善患者預(yù)后，提高患者生存質(zhì)量具有重要意義。

液體活檢作為新型的檢測手段，具有易獲取、創(chuàng)傷小、快捷等優(yōu)點，是癌癥檢查發(fā)展的趨勢與方向。外泌體(exosomes)是細胞在生理或病理條件下釋放到細胞外的直徑在40-150nm的雙層囊泡結(jié)構(gòu)，由細胞膜內(nèi)陷后通過一系列復(fù)雜的機制形成多囊泡小體，通過與細胞膜融合，釋放外泌體至細胞外。外泌體可攜帶一系列生物活性物質(zhì)，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸(microRNA，CicroRNA及LncRNA)等。研究表明多種腫瘤細胞如：食管癌、肺癌、甲狀腺癌、乳腺癌、胃癌細胞等均可分泌外泌體，并可通過不同分子機制影響腫瘤化療耐藥、腫瘤免疫、血管生成及遷移侵襲等過程，成為近年來腫瘤研究的熱點。外泌體幾乎在所有體液，如血液、尿液、唾液、母乳、精液、前列腺液、腦脊液、羊水和胸腔積液等中均有分布，且具有較高的組織特異性和穩(wěn)定性，可用作腫瘤無創(chuàng)性檢查。

microRNA是一類內(nèi)源性的非編碼RNA分子，長約17-24nt，其可通過調(diào)控靶基因的3'-UTR區(qū)域，進而調(diào)控細胞的分化、增殖、凋亡，發(fā)揮其促癌或抑癌基因的作用。研究表明，循環(huán)miRNA主要存在于血漿外泌體中，發(fā)現(xiàn)特異性高血漿外泌體microRNA并應(yīng)用于食管癌的診斷及預(yù)后判斷，對食管癌的診療必將起到巨大的推動作用。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了miR-493-5p的檢測試劑在制備食管癌檢測試劑盒中的應(yīng)用及食管癌檢測試劑盒。本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn)，miR-493-5p可以作為一種食管癌早期診斷的標志物、食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標志物、以及手術(shù)前后血漿外泌體變化的標志物，利用miR-493-5p的檢測試劑制備得到一種食管癌檢測試劑盒，可以方便、快捷、特異性高的進行食管癌的早期診斷、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)警、以及判斷食管癌患者手術(shù)治療情況，為食管癌患者的治療提供指導(dǎo)。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

miR-493-5p的檢測試劑在制備食管癌檢測試劑盒中的應(yīng)用。

根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述miR-493-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述食管癌為食管鱗癌。

根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述食管癌檢測試劑盒為實時熒光定量PCR檢測試劑盒。

根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述食管癌檢測試劑盒用于檢測血漿外泌體中的miR-493-5p。