本發(fā)明公開了一種酶催化合成苯丙氨酸寡肽?賴氨酸寡肽共聚物的方法，屬于材料科學領域。本發(fā)明使用蛋白酶為催化劑催化合成酪氨酸寡肽和苯丙氨酸寡肽，然后在固定化蛋白酶的催化下在壬烷/二甲亞砜混合溶劑中將賴氨酸寡肽、苯丙氨酸寡肽進行聚合，制備得到苯丙氨酸寡肽?賴氨酸寡肽共聚物。本發(fā)明的苯丙氨酸寡肽?賴氨酸寡肽共聚物的產率達到45～75％。該方法涉及的苯丙氨酸寡肽?賴氨酸寡肽共聚物的合成催化劑為固定化酶，具有反應條件溫和、環(huán)境更友好、副反應少等優(yōu)點，而且避免了繁瑣的保護和去保護步驟。

技術領域

本發(fā)明涉及苯丙氨酸寡肽-賴氨酸寡肽共聚物的合成方法，具體涉及一種酶催化合成苯丙氨酸寡肽-賴氨酸寡肽共聚物的方法，屬于材料科學領域。

背景技術

人工聚肽是以天然氨基酸為單體進行聚合反應，通過酰胺鍵而形成的聚氨基化合物，性質與天然肽、聚氨基酸和蛋白質類似。由人工聚肽形成的材料具有良好的生物親和性和可降解性。聚肽或其改性低聚物表現(xiàn)出自組裝、液晶行為等獨特結構性質，具有較強可塑性，在生物、醫(yī)藥和天然高分子材料領域具有很大的應用潛力。

聚苯丙氨酸具有很強的疏水疏油性，通過賴氨酸聚肽的修飾，可提高聚苯丙氨酸的親水性，從而用于藥物輸送、功能材料、食品和化妝品等領域。賴氨酸聚肽的研究在國外特別是在日本已比較成熟，我國剛剛起步。它是一種天然的生物代謝產品，具有很好的殺菌能力和熱穩(wěn)定性，是具有優(yōu)良防腐性能和巨大商業(yè)潛力的生物防腐劑。在日本，賴氨酸聚肽已被批準作為防腐劑添加于食品中，廣泛用于方便米飯、濕熟面條、熟菜、海產品、醬類、醬油、魚片和餅干的保鮮防腐中。同時研究還發(fā)現(xiàn)賴氨酸聚肽和其他天然抑菌劑配合使用，有明顯的協(xié)同增效作用，可以提高其抑菌能力。

氨基酸聚合法有固相法、NCA法和酶催化法。與其它聚合方法相比，酶催化法具有反應條件溫和、環(huán)境更友好、副反應少等優(yōu)點，而且避免了繁瑣的保護和去保護步驟。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于針對化學法合成寡肽中存在的不足之處，提供一種反應條件溫和、環(huán)境更友好的酶法制備寡肽的方法。

本發(fā)明的第一個目的是提供一種固定化酶催化合成苯丙氨酸寡肽-賴氨酸寡肽共聚物的方法，所述方法包括如下步驟：

(1)合成賴氨酸寡肽和苯丙氨酸寡肽；

(2)制備苯丙氨酸寡肽-賴氨酸寡肽共聚物，包括：在壬烷/二甲亞砜混合溶劑中加入步驟(1)得到的賴氨酸寡肽、苯丙氨酸寡肽以及固定化蛋白酶，在30～70℃下反應10～24h，反應結束后，加入六氟異丙醇，過濾取濾液，將濾液干燥后，加入無水乙醇浸泡6-12小時，離心，去除上清液，再加入預熱后的丙酮直至全部溶解，將所得溶液在-4-0℃靜置8-12小時，減壓抽濾，所得沉淀即為苯丙氨酸寡肽-賴氨酸寡肽共聚物。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述壬烷/二甲亞砜混合溶劑中壬烷和二甲亞砜的體積比為3:7～1:9。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述賴氨酸寡肽和苯丙氨酸寡肽的添加量與壬烷/二甲亞砜混合溶劑的質量g體積mL比為1:1～4，其中，賴氨酸寡肽與苯丙氨酸寡肽的質量比為1:0.8～1:1.2。

在本發(fā)明的一種實施方式中，固定化蛋白酶的加入量為0.1～0.5U/g_底物，所述底物為賴氨酸寡肽和苯丙氨酸寡肽。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述干燥優(yōu)選真空干燥，操作參數(shù)為在20-50℃下真空干燥3-12小時。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述離心為在5000～10000rpm離心3～6分鐘。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述合成賴氨酸寡肽的方法包括：在磷酸緩沖液中加入L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽和蛋白酶，反應混合物在20～50℃下反應6～12小時，反應結束后，在反應混合物中加入冰乙醇，離心取沉淀，并用冰乙醇洗滌，再次離心取沉淀，冷凍干燥后得到賴氨酸寡肽。