[發明專利]測定人血漿中托法替布濃度的方法在審
| 申請號： | 202011151408.0 | 申請日： | 2020-10-27 |
| 公開（公告）號： | CN112461946A | 公開（公告）日： | 2021-03-09 |
| 發明（設計）人： | 黎明;熊婉瑩;尹小麗 | 申請（專利權）人： | 湖南泰新醫藥科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 410000 湖南省長沙市長沙高新*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 測定 血漿 中托法替布 濃度 方法 | ||
1.一種測定人血漿中托法替布濃度的方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)樣品制備：取待測血漿樣本，加入內標工作溶液，渦旋，沉淀蛋白，渦旋離心，取上清液；
2)液相色譜-質譜聯用檢測：
色譜條件如下：色譜柱：Waters Xselectable HSS T3；流動相：流動相A：0.1％甲酸水溶液；流動相B：乙腈；洗脫方式：梯度洗脫；流速：0.400～0.600mL/min；
質譜條件如下：采用ESI源，正離子MRM模式檢測；
3)標準曲線制備：取托法替布標準工作溶液，稀釋到空白血漿中，配制托法替布標準曲線血漿樣品；取標準曲線血漿樣品，加入內標工作溶液，渦旋，沉淀蛋白，渦旋離心，取上清液進樣LC-MS/MS系統，記錄每個濃度的托法替布對應的峰面積，以托法替布和內標的峰面積比值為縱坐標，以托法替布濃度為橫坐標，制備標準曲線回歸方程；
4)待測物托法替布測定：將待測血漿按步驟1)制備樣品，按步驟2)采用LC-MS/MS方法檢測，記錄待測物托法替布對應的峰面積，將待測物托法替布的色譜峰面積與內標峰面積的比值代入獲得的標準曲線回歸方程，計算測定的待測物托法替布的相應濃度。
2.根據權利要求1所述的測定人血漿中托法替布濃度的方法，其特征在于，所述內標工作溶液中的內標為托法替布-d3；所述沉淀蛋白使用的沉淀劑為乙腈；所述渦旋的時間為3s；所述渦旋離心的條件為：渦旋5min，離心2490g，4℃，10min。
3.根據權利要求1所述的測定人血漿中托法替布濃度的方法，其特征在于，所述液相色譜-質譜聯用的條件如下：
色譜條件
色譜柱：Waters Xselectable HSS T3(2.1×100mm，3.5micron)
流動相A：0.1％甲酸水溶液；流動相B：乙腈
流速0.400～0.600mL/min；停止時間4.00min；
洗針液沖洗：2s；進樣量：20μL；柱溫：35℃；
流動相比例設置如下：
質譜條件
采用ESI源，正離子MRM模式檢測：
質譜切換閥設置如下：
Start Time Position 1 1.0 B 2 3.5 A
離子源參數設置如下：
Parameter Value(+) IS 5500 Gas1 60 Gas2 60 CAD 10 CUR 35 Temp(℃) 550
。
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