[發(fā)明專利]一種測定獨活香豆素類成分含量的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011133938.2 | 申請日: | 2020-10-21 |
| 公開(公告)號: | CN112129860B | 公開(公告)日: | 2022-09-30 |
| 發(fā)明(設計)人: | 李晉;常艷旭;楊玉喬;何俊;劉睿;龐曉麗 | 申請(專利權(quán))人: | 天津中醫(yī)藥大學 |
| 主分類號: | G01N30/02 | 分類號: | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/74 |
| 代理公司: | 北京柏杉松知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 11413 | 代理人: | 劉繼富;王春偉 |
| 地址: | 301617 天津市*** | 國省代碼: | 天津;12 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 測定 獨活 香豆素類 成分 含量 方法 | ||
1.一種測定獨活中香豆素類成分含量的方法,其特征在于,同時測定獨活中6種香豆素類成分的含量;所述6種香豆素類成分包括二氫歐山芹醇-β-D-葡萄糖苷、二氫歐山芹醇、當歸醇A、二氫歐山芹醇乙酸酯、蛇床子素、二氫歐山芹醇當歸酸酯,所述方法包括:
(1)建立6種香豆素類成分的標準曲線;
以甲醇為溶劑,配制5-10個含有不同已知濃度的6種香豆素類成分的混合對照品溶液;其中,二氫歐山芹醇-β-D-葡萄糖苷、二氫歐山芹醇、二氫歐山芹醇當歸酸酯濃度分別為0.005-8μg/mL,當歸醇A、二氫歐山芹醇乙酸酯濃度分別為0.02-30μg/mL,蛇床子素濃度為0.3-30μg/mL;
在相同的色譜條件和熒光檢測條件下,將體積V1的各混合對照品溶液分別注入高效液相色譜儀中,通過熒光檢測確定各色譜峰的香豆素類成分,并獲得各香豆素類成分的色譜峰面積;
其中,所述色譜條件包括:
色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱;
流動相:A相為甲醇,B相為水;采用體積分數(shù)40-85%A相,15-60%B相,梯度洗脫;流速:0.2-0.5mL/分鐘;柱溫:25-35℃;進樣量V1:1-5μL;
以各香豆素類成分色譜峰的峰面積為縱坐標,以各香豆素類成分的濃度為橫坐標,分別建立各香豆素類成分的標準曲線;
其中,所述梯度洗脫具體為:0-5分鐘,40%-40%A;5-10分鐘,40%-45%A;10-15分鐘,45%-45%A;15-25分鐘,45%-52%A;25-35分鐘,52%-52%A;35-37分鐘,52%-75%A;37-42分鐘,75%-80%A;42-45分鐘,80%-85%A;45-50分鐘,85%-85%A;50-52分鐘,85%-40%A;52-57分鐘,40%-40%A;
(2)獲得待測樣品溶液的色譜峰面積;
將質(zhì)量為M的待測樣品,以體積為V2、濃度為30-200毫摩爾每升的離子液體水溶液進行微波提取,過濾后作為待測樣品溶液,其中,M/V2為(3-30):1mg/mL,微波提取功率為50-600W,微波提取時間為1-7分鐘;
在與步驟(1)中相同的色譜條件和熒光檢測條件下,取體積V1的待測樣品溶液注入高效液相色譜儀中,通過熒光檢測確定各色譜峰的香豆素類成分,并獲得各香豆素類成分的色譜峰面積;
其中,所述離子液體選自1-十二烷基-3-甲基咪唑三氟甲基磺酸鹽、1-十二烷基-3-甲基-1H-咪唑氫硫酸鹽、溴化-1-十二烷基-3-甲基咪唑和溴化-1-乙基-3-甲基咪唑中的至少一種;
(3)確定待測樣品中6種香豆素類成分的含量;
根據(jù)已建立的各香豆素類成分的標準曲線,由待測樣品溶液中各香豆素類成分的色譜峰面積,分別獲得各香豆素類成分的濃度C1,并按照下列公式分別計算出待測樣品中6種香豆素類成分的含量C;
C=C1×V2/M。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,在步驟(2)中,將質(zhì)量為M的待測樣品,以體積為V2、濃度為50-150毫摩爾每升的離子液體水溶液進行微波提取,過濾后作為待測樣品溶液,其中,M/V2為(5-20):1mg/mL,微波提取功率為100-500W,微波提取時間為2-6分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,在步驟(2)中,將質(zhì)量為M的待測樣品,以體積為V2、濃度為70-130毫摩爾每升的離子液體水溶液進行微波提取,過濾后作為待測樣品溶液,其中,M/V2為(5-15):1mg/mL,微波提取功率為200-400W,微波提取時間為2-5分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的方法,其特征在于,所述混合對照品溶液中,二氫歐山芹醇-β-D-葡萄糖苷、二氫歐山芹醇、二氫歐山芹醇當歸酸酯濃度分別為0.02-5μg/mL,當歸醇A、二氫歐山芹醇乙酸酯濃度分別為0.1-25μg/mL,蛇床子素濃度為0.5-25μg/mL。
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