[發明專利]一種用于黃鱔生殖干細胞的分離方法及培養基有效
| 申請號： | 202011132466.9 | 申請日： | 2020-10-21 |
| 公開（公告）號： | CN112251399B | 公開（公告）日： | 2022-12-09 |
| 發明（設計）人： | 孫玉華;孫曉云;王永鑫 | 申請（專利權）人： | 中國科學院水生生物研究所 |
| 主分類號： | C12N5/075 | 分類號： | C12N5/075;C12N5/076 |
| 代理公司： | 武漢大楚知識產權代理事務所(普通合伙) 42257 | 代理人： | 徐楊松 |
| 地址： | 430072 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 黃鱔 生殖 干細胞 分離 方法 培養基 | ||
【權利要求書】：
1.一種用于分離培養黃鱔生殖干細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1：從黃鱔分離性腺組織；
S2：消化所述性腺組織，獲得游離細胞；
S3：使用黃鱔生殖干細胞培養基培養所述游離細胞，使所述游離細胞中的黃鱔生殖干細胞貼壁和擴增，棄去液體即得到分離的所述黃鱔生殖干細胞；
所述黃鱔生殖干細胞培養基包括基礎培養基和FBS，所述FBS的濃度為5-8%，所述基礎培養基為RPMI1640；
所述黃鱔生殖干細胞培養基包還包括1-5%的KSR、1-5%的黃鱔血清、0.5-2 mM丙酮酸鈉、1-4 mM L-谷氨酰胺、10-100 μM β-巰基乙醇、10-20 mM Hepes、5-30 ng bFGF和5-20ng EGF；
S2包括以下步驟：
S21：使用胰蛋白酶消化所述性腺組織，離心取沉淀，為消化產物；
S22：將所述消化產物重懸，用40 μm的細胞篩過濾，取濾液，離心沉淀重懸后得到所述游離細胞；
S3包括以下步驟：
S31：將所述游離細胞加入到裝有所述培養基的培養容器中，于28±0.5℃下,5% CO2下靜置培養；
S32：培養60-84 h后，更換新鮮的所述培養基；
S33：每48 h更換一次新鮮的所述培養基，直至適當的細胞匯合度，棄去液體即得到分離的所述黃鱔生殖干細胞。
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