[發(fā)明專利]FRT細(xì)胞株在制備篩選CFTR調(diào)節(jié)劑的制劑或試劑盒中的應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202011074687.5 | 申請(qǐng)日： | 2020-10-09 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN112280820A | 公開(kāi)（公告）日： | 2021-01-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 郝峰;楊敬研;姜琳;鄭鍇;解宇浩;張嘉琪 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 吉林醫(yī)藥學(xué)院 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/02 | 分類號(hào)： | C12Q1/02;C12N5/10;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227 | 代理人： | 張柳 |
| 地址： | 132000 吉林*** | 國(guó)省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | frt 細(xì)胞株 制備 篩選 cftr 調(diào)節(jié)劑 制劑 試劑盒 中的 應(yīng)用 | ||
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及FRT細(xì)胞株在制備篩選CFTR調(diào)節(jié)劑的制劑或試劑盒中的應(yīng)用。倒置熒光顯微鏡下觀察到CFTR表達(dá)在細(xì)胞膜上，YFP?H148Q/I152L表達(dá)于胞漿中；成功構(gòu)建共表達(dá)CFTR和YFP?H148Q/I152L的FRT細(xì)胞模型；熒光變化斜率值與CFTR調(diào)節(jié)劑濃度成劑量依賴關(guān)系，該模型可篩選CFTR調(diào)節(jié)劑；熒光變化斜率值可反映胞漿內(nèi)cAMP濃度，該模型可敏感檢測(cè)胞漿內(nèi)cAMP濃度。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及FRT細(xì)胞株在制備篩選CFTR調(diào)節(jié)劑的制劑或試劑盒中的應(yīng)用。
背景技術(shù)
第二信使是細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的啟動(dòng)組成部件之一，主要包括：環(huán)腺苷酸(cAMP)、環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)、鈣離子(Ca2+)、肌醇三磷酸(IP3)、甘油二酯(DAG)等。cAMP作為胞漿內(nèi)重要的第二信使，可調(diào)控細(xì)胞內(nèi)諸多重要的生理過(guò)程，如參與細(xì)胞的增值與分化、激素的合成與分泌、基因表達(dá)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、神經(jīng)節(jié)突觸傳遞的調(diào)節(jié)等。胞漿內(nèi)cAMP也參與許多病理過(guò)程，是治療心臟病、急性白血病、慢性呼吸道疾病、某些腫瘤等疾病的潛在靶點(diǎn)。因此，胞漿內(nèi)第二信使cAMP一直是科研領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。目前，檢測(cè)胞漿內(nèi)cAMP的方法主要有報(bào)告基因檢測(cè)法、競(jìng)爭(zhēng)法、放射性標(biāo)記法等。報(bào)告基因檢測(cè)法缺點(diǎn)是蛋白的半衰期較短，常規(guī)分析的重復(fù)性差。競(jìng)爭(zhēng)法缺點(diǎn)是操作繁瑣，試劑耗費(fèi)高。放射性標(biāo)記法缺點(diǎn)是需要特定的儀器設(shè)備，對(duì)操作人員技術(shù)要求高，對(duì)操作人員可能有潛在風(fēng)險(xiǎn)。
發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明建立了一種基于CFTR可敏感檢測(cè)胞漿內(nèi)第二信使cAMP的細(xì)胞模型。
為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：
本發(fā)明還提供了FRT細(xì)胞株在檢測(cè)胞漿內(nèi)cAMP濃度的應(yīng)用；所述FRT細(xì)胞株中ANO1和YFP-H148Q/I152L共表達(dá)；
其中，相對(duì)熒光強(qiáng)度變化值/slope值/斜率值與細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度呈現(xiàn)良好的正相關(guān)；
所述相對(duì)熒光強(qiáng)度變化值/slope值/斜率值計(jì)算如下：
0s～1.4s的相對(duì)熒光值的平均值；
y：2.4s～14.8s與0.6s～13s做線性回歸分析所得到的線性回歸的結(jié)果。
本發(fā)明還提供了FRT細(xì)胞株在制備檢測(cè)胞漿內(nèi)cAMP濃度的制劑或試劑盒中的應(yīng)用；所述FRT細(xì)胞株中ANO1和YFP-H148Q/I152L共表達(dá)；
其中，相對(duì)熒光強(qiáng)度變化值/slope值/斜率值與細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度呈現(xiàn)良好的正相關(guān)；
所述相對(duì)熒光強(qiáng)度變化值/slope值/斜率值計(jì)算如下：
0s～1.4s的相對(duì)熒光值的平均值；
y：2.4s～14.8s與0.6s～13s做線性回歸分析所得到的線性回歸的結(jié)果。
本發(fā)明還提供了FRT細(xì)胞株在制備預(yù)防和/或治療與胞漿內(nèi)cAMP相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用；所述FRT細(xì)胞株中ANO1和YFP-H148Q/I152L共表達(dá)；
其中，相對(duì)熒光強(qiáng)度變化值/slope值/斜率值與細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度呈現(xiàn)良好的正相關(guān)；
所述相對(duì)熒光強(qiáng)度變化值/slope值/斜率值計(jì)算如下：
0s～1.4s的相對(duì)熒光值的平均值；
y：2.4s～14.8s與0.6s～13s做線性回歸分析所得到的線性回歸的結(jié)果。
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