[發明專利]使用原核細胞發酵表達血管緊張素轉化酶2的方法在審
| 申請號： | 202011049030.3 | 申請日： | 2020-09-29 |
| 公開（公告）號： | CN112626099A | 公開（公告）日： | 2021-04-09 |
| 發明（設計）人： | 邢新會;盧元;王怡;蘇楠;李璐;張翀 | 申請（專利權）人： | 清華大學;清華大學深圳國際研究生院 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N15/75;C12N15/77;C12N15/76;C12N1/21;C12N15/57;C12R1/125;C12R1/46;C12R1/15;C12R1/19 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 使用 原核細胞 發酵 表達 血管 緊張 轉化 方法 | ||
1.一種質粒，其包含天然ACE2序列、敲除了跨膜區和胞內區的ACE2序列、或者進一步敲除了部分胞外區的ACE2序列作為外源基因。
2.如權利要求1所述的質粒，其在如權利要求1所述的ACE2序列的下游還包含標簽蛋白的序列。
3.如權利要求2所述的質粒，其中，所述標簽蛋白選自HIS、Flag、HA、Myc、Strep-II中的任一個，最優選為HIS或Strep-II標簽蛋白。
4.如權利要求3所述的質粒，其中，所述質粒選自pET系列、pGEX系列、pQE系列、pBAD系列和pGAD系列質粒中的任一個，最優選所述質粒為具有如SEQ ID NO.7所示序列的pET-30a(+)質粒。
5.如權利要求4所述的質粒，其中天然ACE2具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列表達、敲除了跨膜區和胞內區的ACE2具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列表達，而進一步敲除了部分胞外區的ACE2的氨基酸序列和核苷酸序列具有如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列表達。
6.一種原核生物，其導入有如權利要求1-5的任一項所述的質粒。
7.如權利要求6所述的原核生物，所述原核生物為選自枯草芽孢桿菌、鏈霉菌、谷氨酸棒狀桿菌或大腸桿菌的細菌，最優選為大腸桿菌。
8.如權利要求7所述的原核生物，其中，所述大腸桿菌菌株選自TB1、JM109、TOP10、BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS或Rosetta(DE3)中的任一個，最優選為BL21(DE3)或BL21(DE3)pLysS。
9.利用原核生物生產血管緊張素轉化酶2(ACE2)的方法，其包括：
-構建質粒，該質粒含有天然ACE2序列、敲除了跨膜區和胞內區的ACE2序列、或者進一步敲除了部分胞外區的ACE2序列作為外源基因；
-將質粒導入宿主原核生物；
-對宿主原核生物進行培養，在培養物中表達ACE2；
-從培養物中對ACE2進行提取純化。
10.如權利要求9所述的生產方法，其中，所述宿主原核生物導入有如權利要求1-5的任一項所述的質粒。
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