[發(fā)明專利]一種低產(chǎn)2-苯乙醇的基因工程菌及其應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010933160.7 | 申請日： | 2020-09-08 |
| 公開（公告）號： | CN112011473B | 公開（公告）日： | 2023-03-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 肖冬光;王亞平;張翠英;陳葉福;杜麗平;郭學(xué)武 | 申請（專利權(quán)）人： | 天津科技大學(xué) |
| 主分類號： | C12N1/19 | 分類號： | C12N1/19;C12N15/90;C12G3/021;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京瑞盛銘杰知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11617 | 代理人： | 郭曉迪 |
| 地址： | 300457 天津市濱*** | 國省代碼： | 天津;12 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 低產(chǎn) 乙醇 基因工程 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是由釀酒酵母AY15的單倍體菌株α5將核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的ARO80基因全部缺失得到。
2.如權(quán)利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以釀酒酵母為出發(fā)菌株，通過同源重組的方法敲除其ARO80基因得到。
3.如權(quán)利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌通過如下步驟構(gòu)建得到：
(1)以釀酒酵母的基因組為模板，PCR擴增得到ARO80基因的上、下游序列的DNA分子片段；
(2)通過醋酸鋰化學(xué)轉(zhuǎn)化法，將步驟(1)所述上、下游序列的DNA分子片段以及篩選標(biāo)記基因轉(zhuǎn)化至所述釀酒酵母中，通過同源重組得到敲除了ARO80基因的重組菌株；
(3)采用Cre-loxP重組系統(tǒng)敲除步驟(2)所述重組菌株中的篩選標(biāo)記基因；
(4)傳代培養(yǎng)以使步驟(3)引入的游離質(zhì)粒丟失，獲得釀酒酵母重組菌。
4.如權(quán)利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，所述篩選標(biāo)記基因為KanMX抗性基因。
5.權(quán)利要求1-4任一項所述基因工程菌在液態(tài)發(fā)酵法生產(chǎn)白酒中的用途。
6.如權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，所述液態(tài)發(fā)酵法生產(chǎn)白酒是以所述基因工程菌作為生產(chǎn)菌株，以高粱為原料，制備高粱水解液作為發(fā)酵培養(yǎng)基，接種所述基因工程菌，靜置發(fā)酵。
7.如權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于，所述基因工程菌的接種量為5×106CFU/mL，30℃靜置發(fā)酵。
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