本發(fā)明涉及丹皮酚，尤其涉及丹皮酚用作黃曲霉抑菌劑的實驗方法，引入丹皮酚作為黃曲霉抑制劑，具有高效、無毒、環(huán)境友好、經濟適用等優(yōu)點，通過檢測不同濃度丹皮酚對黃曲霉菌絲的影響，能夠快速的判斷丹皮酚是否能夠抑制黃曲霉，還能夠得到丹皮酚抑菌濃度低值MIC，操作方便，通過菌絲收集及機理測定，能夠準確的判斷丹皮酚的抑菌機理，不僅能夠證實丹皮酚對黃曲霉的抑制作用，還能夠為施用場合的選擇提供依據，通過表面超微結構檢測、內部檢測、隔膜數(shù)量檢測、幾丁質含量檢測、β?1，3?葡聚糖檢測，能夠綜合的判斷抑菌機理，通過驗證試驗進行實施驗證，能夠證實丹皮酚用作黃曲霉抑菌劑的有效性，形成一個完整的實驗體系，可靠性高。

技術領域

本發(fā)明涉及丹皮酚，尤其涉及丹皮酚用作黃曲霉抑菌劑。

背景技術

丹皮酚是從牡丹根皮中提取出來的一種中藥活性成分，此藥物具有抗炎、陣痛、解熱和抑制變態(tài)反應等作用。同時，丹皮酚具有廣譜抑菌性，對細菌和真菌都有抑制作用，但關于丹皮酚抑制黃曲霉卻鮮有報道，抑菌機理更是尚未提出。

黃曲霉，一種常見的霉菌，極易在農作物產后儲藏和食品加工過程中發(fā)生污染，作為一種條件致病菌，還能夠引發(fā)人和動物患曲霉病。同時，黃曲霉產生黃曲霉毒素，其毒性強，致癌幾率大，嚴重威脅人類身體健康。

鑒于黃曲霉及其毒素的危害之大，迫切需要尋找一種高效、無毒的抑菌劑。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術中的不足，提供一種丹皮酚用作黃曲霉抑菌劑的實驗方法。

本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的：一種丹皮酚用作黃曲霉抑菌劑的實驗方法，包括以下步驟，

步驟一，制備培養(yǎng)基，制備兩組培養(yǎng)基組，分別為第一培養(yǎng)基組和第二培養(yǎng)基組；

步驟二，菌絲培養(yǎng)，在第一培養(yǎng)基組中加入丹皮酚，至第一培養(yǎng)基組中各培養(yǎng)基的丹皮酚濃度不同，在第一組培養(yǎng)基組的各培養(yǎng)基中插入黃曲霉菌絲塊，初始狀態(tài)下，第一組培養(yǎng)基組中各培養(yǎng)基中的黃曲霉菌絲直徑相同，孵育，定期檢測黃曲霉菌落的直徑，得到丹皮酚抑菌濃度低值MIC；

步驟三，菌絲收集，在第二培養(yǎng)基組中添加黃曲霉孢子，初始狀態(tài)下，第二培養(yǎng)基組中各培養(yǎng)基中的黃曲霉孢子含量相同，培養(yǎng)24h，然后在第二培養(yǎng)基組中分批加入丹皮酚，至丹皮酚的終濃度達到MIC，再培養(yǎng)24h，收集第二培養(yǎng)基組中各培養(yǎng)基的黃曲霉菌絲，分別進行冷凍干燥后，根據丹皮酚的濃度值進行分組標記備用；

步驟四，機理測定，將步驟三得到的黃曲霉菌絲分別進行表面超微結構檢測、內部檢測、隔膜數(shù)量檢測、幾丁質含量檢測、β-1，3-葡聚糖檢測；

步驟五，驗證試驗，取多份黃曲霉孢子懸浮液，向每份黃曲霉孢子懸浮液中加入丹皮酚，至各份黃曲霉孢子懸浮液中的丹皮酚濃度分別為0、1/2MIC、MIC，將經過無菌水沖洗后的玉米粒切口，注入混合有丹皮酚的黃曲霉孢子懸浮液，然后放入培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，定期測量各玉米粒上黃曲霉的直徑值。

進一步地，步驟二中，第一培養(yǎng)基組中各培養(yǎng)基的丹皮酚濃度值分別為0mg/mL、0.3125mg/mL、0.625mg/mL、1.25mg/mL、2.5mg/mL、5mg/mL。

進一步地，步驟三中第二培養(yǎng)基組中各培養(yǎng)基的丹皮酚濃度值分別為0、1/2MIC、MIC。

進一步地，所述表面超微結構檢測包括以下步驟，

步驟a1，將步驟三得到的黃曲霉菌絲于濃度為2.5%的戊二醛中固定8-12 h，然后分別移入不同濃度的乙醇中，洗脫，干燥，得到第一組樣品；

步驟a2，將第一組樣品通過導電粘合劑粘附至樣品臺，通過離子噴霧器噴涂鍍金，然后通過掃描電子顯微鏡觀察并拍照。

進一步地，所述內部檢測包括以下步驟，