[發明專利]等溫擴增檢測4種巴貝蟲的試劑、試劑盒及其應用有效
| 申請號： | 202010745565.8 | 申請日： | 2020-07-29 |
| 公開（公告）號： | CN111893201B | 公開（公告）日： | 2021-07-20 |
| 發明（設計）人： | 陳木新;張仁利;張巖;黃達娜;陳家旭;陳燕旌;艾琳;邊素瑩;唐屹君;鄭惠文;張倩;蘇川;周曉農 | 申請（專利權）人： | 深圳市疾病預防控制中心（深圳市衛生檢驗中心;深圳市預防醫學研究所） |
| 主分類號： | C12Q1/6893 | 分類號： | C12Q1/6893;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 深圳中一聯合知識產權代理有限公司 44414 | 代理人： | 方良 |
| 地址： | 518000 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 等溫 擴增 檢測 種巴貝蟲 試劑 試劑盒 及其 應用 | ||
1.一種等溫擴增檢測4種巴貝蟲的試劑，其特征在于，所述試劑同時包括如下用于檢測田鼠巴貝蟲的環介導等溫核酸擴增引物組：
第一外引物SEQ ID No.1、第二外引物SEQ ID No.2、第一內引物SEQ ID No.3、第二內引物SEQ ID No.4、第一環引物SEQ ID No.5、第二環引物SEQ ID No.6；
用于檢測分歧巴貝蟲的環介導等溫核酸擴增引物組：
第三外引物SEQ ID No.7、第四外引物SEQ ID No.8、第三內引物SEQ ID No.9、第四內引物SEQ ID No.10、第三環引物SEQ ID No.11、第四環引物SEQ ID No.12；
用于檢測獵戶巴貝蟲的環介導等溫核酸擴增引物組：
第五外引物SEQ ID No.13、第六外引物SEQ ID No.14、第五內引物SEQ ID No.15、第六內引物SEQ ID No.16、第五環引物SEQ ID No.17、第六環引物SEQ ID No.18；
用于檢測鄧氏巴貝蟲的環介導等溫核酸擴增引物組：
第七外引物SEQ ID No.19、第八外引物SEQ ID No.20、第七內引物SEQ ID No.21、第八內引物SEQ ID No.22、第七環引物SEQ ID No.23、第八環引物SEQ ID No.24。
2.根據權利要求1所述的試劑，其特征在于，還包括可視化恒溫擴增試劑，所述可視化恒溫擴增試劑包括如下組分：
聚合酶、pH染料、等溫擴增緩沖液。
3.根據權利要求2所述的試劑，其特征在于：所述聚合酶為Bst聚合酶；所述pH染料為間甲酚紫；所述等溫擴增緩沖液包括KCL、MgSO4、吐溫20、dNTPs和無核酸酶水。
4.一種等溫擴增檢測4種巴貝蟲的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1～3任一所述的試劑。
5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括核酸提取耗材、陽性質控品和陰性質控品。
6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于：所述核酸提取耗材包括核酸提取液和用于核酸提取的器件；其中，
所述核酸提取液包括樣品處理液、裂解液、清洗液和洗脫液；
所述器件包括取液器、核酸裂解容器和核酸富集器；
所述陽性質控品為田鼠巴貝蟲、分歧巴貝蟲、獵戶(維氏)巴貝蟲和鄧氏巴貝蟲的核酸模板；
所述陰性質控品為無核酸酶水。
7.根據權利要求4-6任一項所述的試劑盒，其特征在于：所述第一外引物SEQ ID No.1、第二外引物SEQ ID No.2、第三外引物SEQ ID No.7、第四外引物SEQ ID No.8、第五外引物SEQ ID No.13、第六外引物SEQ ID No.14、第七外引物SEQ ID No.19、第八外引物SEQ IDNo.20的使用濃度均為1.8μM；
所述第一內引物SEQ ID No.3、第二內引物SEQ ID No.4、第三內引物SEQ ID No.9、第四內引物SEQ ID No.10、第五內引物SEQ ID No.15、第六內引物SEQ ID No.16、第七內引物SEQ ID No.21、第八內引物SEQ ID No.22的使用濃度均為57.6μM；
所述第一環引物SEQ ID No.5、第二環引物SEQ ID No.6、第三環引物SEQ ID No.11、第四環引物SEQ ID No.12、第五環引物SEQ ID No.17、第六環引物SEQ ID No.18、第七環引物SEQ ID No.23、第八環引物SEQ ID No.24的使用濃度均為20μM。
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