本發(fā)明提供了一種烷基化修飾的乙肝病毒免疫吸附劑及其制備方法。該烷基化修飾的乙肝病毒免疫吸附劑包括活化的吸附載體以及與活化的吸附載體偶聯(lián)結(jié)合的烷基化修飾的乙肝病毒抗體，所述烷基化修飾是在所述乙肝病毒抗體與所述活化的吸附載體偶聯(lián)后進行，用于修飾所述乙肝病毒抗體中的巰基。其制備方法首先將活化的吸附載體與乙肝病毒抗體進行偶聯(lián)，然后對乙肝病毒抗體中的巰基進行烷基化修飾，最后進行還原處理，得到烷基化修飾的乙肝病毒免疫吸附劑。本發(fā)明通過對偶聯(lián)后的乙肝病毒抗體進行烷基化修飾，能夠得到吸附效率高、特異性好且可再生性好的乙肝病毒免疫吸附劑，增強了臨床使用中的可操作性和重復利用率，進而降低了生產(chǎn)和使用成本。

技術領域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學吸附材料技術領域，尤其涉及一種烷基化修飾的乙肝病毒免疫吸附劑及其制備方法。

背景技術

慢性乙型病毒性肝炎是由于感染乙型肝炎病毒(HBV)引起的，乙型肝炎患者和HBV攜帶者是本病的主要傳染源，HBV可通過母嬰、血液、血液制品、破損的皮膚黏膜以及性接觸等傳播。目前，我國乙型肝炎表面抗原(HBsAg)攜帶者超過1.3億，其中約10％轉(zhuǎn)化為各種慢性肝炎，最終轉(zhuǎn)化為肝硬化甚至肝癌，給社會帶來了巨大的經(jīng)濟負擔。目前乙型肝炎的治療主要是通過藥物，如干擾素、拉米夫定、胸腺肽等，但是由于HBV致病機理及人體免疫系統(tǒng)的高度復雜性，加之HBV在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)持久存在、復制和變異，不能徹底被人類免疫系統(tǒng)和藥物清除，通常使肝臟病變持續(xù)發(fā)生，另外現(xiàn)有的治療手段還存在毒副作用大治療費用高的缺點。

血液中的毒蛋白是乙型肝炎的主要致病因子，因此如果能夠降低甚至清除血液中的毒蛋白及相關標志物，對早期HBV急性感染、肝臟移植患者及慢性乙型肝炎患者都具有重要的治療意義。免疫吸附療法是近20年來發(fā)展起來的一種新技術，它將高度特異性的抗原、抗體或某些具有特定物理化學親和力的物質(zhì)(配體)與吸附材料(載體)結(jié)合，制成吸附劑(柱)。利用配體的特異性吸附性能，選擇性或相對特異性地清除患者血液中內(nèi)源性致病因子，達到緩解病情的目的。合成的吸附劑要求具有高吸附效率和低的非特異性吸附，因此配基和載體的選擇、配基和載體的結(jié)合方式、偶聯(lián)條件、配基的活性等對吸附劑的性能都有重要影響。

例如，中國專利CN102000550B公開了一種高碘酸鹽氧化制備用于清除治病抗體吸附劑的合成方法，該方法采用瓊脂糖凝膠為載體，氧化后與免疫球蛋白進行偶聯(lián)，最后再進行封端、還原，得到用于清除治病抗體的吸附劑。中國專利CN103111270B公開了一種乙型肝炎抗原蛋白的吸附材料及其制備方法，是以鈉離子牛磺膽酸共轉(zhuǎn)運多肽作為配基對乙肝病毒進行吸附，該鈉離子牛磺膽酸共轉(zhuǎn)運多肽采用細菌表達體系表達，在一定程度上對乙肝病毒有特異結(jié)合能力，但原核細菌表達的蛋白在蛋白剪切、修飾和構(gòu)象折疊方面理論上無法達到真核細胞表達的蛋白的水平，因此，對乙肝病毒的特異結(jié)合能力有一定的限制。中國專利CN104772121A公開了一種乙型肝炎病毒表面蛋白吸附劑的制備方法，該方法利用氨基酸處理連接了配基的吸附微球，使配基結(jié)合更牢固，降低了乙型肝炎病毒表面蛋白吸附劑脫落的幾率和速率，提高了應用安全性。中國專利CN1431025A公開了一種血液內(nèi)乙型肝炎病毒免疫吸附柱，是將有效量的乙型肝炎病毒的特異性抗體的Fc端鍵合于經(jīng)環(huán)氧化、氨基化和醛基化的瓊脂糖凝膠顆粒上制備而成。

上述吸附材料的制備過程，一般都需要經(jīng)過吸附載體的活化、偶聯(lián)、封端和還原等過程，偶聯(lián)配體尤其是抗體蛋白在經(jīng)此一系列反應后，其結(jié)構(gòu)及活性均可能會受到不同程度的影響，如發(fā)生二硫鍵的還原或構(gòu)象的轉(zhuǎn)變，導致抗體蛋白出現(xiàn)較多的游離巰基，進而影響免疫球蛋白的特異性吸附能力。

由于以上問題的存在，針對于乙肝病毒，目前還沒有可應用的免疫吸附產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述現(xiàn)有技術存在的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種烷基化修飾的乙肝病毒免疫吸附劑及其制備方法，通過對偶聯(lián)后的乙肝病毒抗體蛋白進行烷基化修飾，封閉游離巰基，從而獲得吸附效率高、特異性好且可再生性好的乙肝病毒免疫吸附劑。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術方案實現(xiàn)：