[發明專利]一種去內毒素質粒提取試劑盒及質粒提取的方法在審
| 申請號： | 202010559313.6 | 申請日： | 2020-06-18 |
| 公開（公告）號： | CN111676215A | 公開（公告）日： | 2020-09-18 |
| 發明（設計）人： | 關紅衛;李婧;魏洪運 | 申請（專利權）人： | 沈陽德宇生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 沈陽中宇天信專利代理有限公司 21248 | 代理人： | 陳慧 |
| 地址： | 110000 遼寧省沈*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 內毒素 質粒 提取 試劑盒 方法 | ||
1.一種去內毒素質粒提取試劑盒，其特征在于，所述的去內毒素質粒提取試劑盒包括菌體裂解試劑、雜質去除試劑、質粒回收試劑和內毒素去除試劑；
其中，菌體裂解試劑分為試劑一和試劑二，內毒素去除試劑分為試劑A和試劑B；按體積比，各個試劑的體積比例為：菌體裂解試劑的試劑一：菌體裂解試劑的試劑二：雜質去除試劑：質粒回收試劑：內毒素去除試劑的試劑A：內毒素去除試劑的試劑B＝(10～30):(10～30):20:20:30:7。
2.根據權利要求1所述的去內毒素質粒提取試劑盒，其特征在于，所述的菌體裂解試劑包括試劑一和試劑二，其中，按體積比，試劑一：試劑二＝1：1；試劑一為含有Tris-HCl和EDTA的水溶液，在試劑一中，Tris-HCl的摩爾濃度為40～60mmol/L，EDTA的摩爾濃度為8～15mmol/L；試劑二為含有氫氧化鈉和SDS的混合水溶液；在試劑二中，氫氧化鈉的摩爾濃度為0.1～0.3mol/L，SDS的質量濃度為0.5～2％。
3.根據權利要求1所述的去內毒素質粒提取試劑盒，其特征在于，所述的雜質去除試劑為含有乙酸﹑醋酸鉀﹑氯化鈣﹑氯化錳和鹽酸胍的水溶液，其中，在雜質去除試劑中，乙酸的摩爾濃度為1.8mol/L，醋酸鉀的摩爾濃度為0.42mol/L，氯化鈣的摩爾濃度為0.42mol/L，氯化錳的摩爾濃度為0.66mol/L，鹽酸胍的摩爾濃度為0.52mol/L。
4.根據權利要求1所述的去內毒素質粒提取試劑盒，其特征在于，所述的質粒回收試劑為含有聚乙二醇8000和二甲基亞砜的水溶液，其中，在質粒回收試劑中，聚乙二醇8000的質量濃度為20～30％，二甲基亞砜的體積濃度為25～30％。
5.根據權利要求1所述的去內毒素質粒提取試劑盒，其特征在于，所述的內毒素去除試劑包括試劑A和試劑B，其中，試劑A為氯化鈉的水溶液，試劑B為牛脫氧膽酸鈉的水溶液；其中，氯化鈉的水溶液中，氯化鈉的摩爾濃度為1～1.5mol/L，牛脫氧膽酸鈉的水溶液的質量百分濃度為15～20％。
6.根據權利要求1所述的去內毒素質粒提取試劑盒，其特征在于，去內毒素質粒提取試劑盒提取的質粒內毒素含量為25-31.25EU/mg。
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