本發明涉及幼蟲活力檢測領域，具體公開了一種線蟲幼蟲活力檢測方法及應用。本發明的線蟲幼蟲活力檢測方法包括：(1)以亞甲基藍作為染色劑對所述線蟲幼蟲進行染色；(2)5～7min后，根據所述線蟲幼蟲的顏色判定所述線蟲幼蟲的活力。當所述線蟲幼蟲為藍色或淡藍色時，判定所述線蟲幼蟲為死亡或低活力幼蟲；當所述線蟲幼蟲為未染色狀態時，判定所述線蟲幼蟲為高活力幼蟲。本發明利用MB為染色劑根據染色深淺效果直觀的鑒別消化道線蟲幼蟲的活力情況，方便快捷、低成本，可有效避免主觀判斷差異，為研究驅蟲藥藥效、耐藥性等方面提供了幫助，對選擇敏感藥物指導臨床用藥等意義重大。

技術領域

本發明涉及幼蟲活力檢測技術領域，具體地說，涉及一種線蟲幼蟲活力檢測方法及應用。

背景技術

線蟲是一類常見的寄生蟲，多在動物消化道內寄生，對宿主的健康產生著不利影響。因此，對于祛除線蟲的方式，現有技術中進行著大量研究，但目前的常用驅蟲藥普遍存在耐藥性問題，困擾著例如家畜養殖等領域。

綿羊消化道線蟲病是危害養羊業健康發展的重要疾病之一，感染極為普遍，易造成較大的經濟損失，是養殖時防治的重點。在生產實踐中，由于長期不科學的應用驅蟲藥，許多消化道線蟲都對常用驅蟲藥產生了不同程度的耐藥性，有效的抗寄生蟲藥越來越少，使綿羊寄生蟲病呈泛濫態勢。因此，需要不斷地投入大量的人力、物力研發新的抗寄生蟲藥物，以滿足生產需要。在新的驅蟲藥物被研發并應用于臨床之前，研究方便快捷的耐藥性檢測方法，選擇敏感驅蟲藥進行及時有效驅蟲尤為重要。

目前應用的寄生蟲耐藥性體外檢測的方法大多針對寄生蟲幼蟲，通過藥物對寄生蟲幼蟲活力的影響或致死率來判斷寄生蟲對驅蟲藥的敏感性，而現有的寄生蟲幼蟲活力檢測方法存在諸如主觀判斷差異、結果不穩定、判斷過程復雜等弊端，很難做到檢測結果的一致性和標準化，難以在生產實踐中推廣應用。

因此，有必要提供一種新的線蟲幼蟲活力檢測方法及應用以解決現有技術中的問題。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明的目的是提供一種有效避免主觀判斷差異，方便快捷、低成本的線蟲幼蟲活力測試方式。

為了實現本發明該目的，本發明的技術方案如下：

一種線蟲幼蟲活力檢測方法，包括：

(1)以亞甲基藍作為染色劑對所述線蟲幼蟲進行染色；

(2)5～7min后，根據所述線蟲幼蟲的顏色判定所述線蟲幼蟲的活力。

本發明采用MB染色法，通過直接觀察(消化道)線蟲幼蟲的著色情況來精確判定幼蟲的活力，該方法穩定可靠，重復性和適用性強，操作簡單。本發明所指的線蟲幼蟲可為第一至第三期幼蟲。一般線蟲蟲卵在27℃的條件下，約12～34h發育至第一期幼蟲，約37～96h發育為第二期幼蟲，約97～168h發育至第三期幼蟲。

現有的靜止期幼蟲形態分析等試驗均需要鑒別幼蟲的活力，但鑒別方法各有不同，且都存在主觀判斷差異、判斷過程復雜、試驗結果不穩定等問題，很難做到檢測結果的一致性、可靠性和標準化，影響了試驗的準確性和適用范圍，難以在生產實踐中推廣應用。將本發明的MB染色法應用于靜止期幼蟲形態分析等試驗，則能使結果判定過程簡單化、操作標準化，有效避免了主觀判斷差異、各個實驗室數據不統一、判斷過程復雜等弊端，極大地擴展了靜止期幼蟲形態分析等試驗的實用性，有望在生產實踐中推廣應用。

現有用于生物染色的染料種類眾多，用于蟲卵染色的方案也有報道，但本發明經大量研究發現，對于線蟲幼蟲(尤其是捻轉血矛線蟲的幼蟲)，采用本發明的染色方案才能更好地、簡便快捷地實現活力判斷的效果。

本發明的步驟(2)中判定所述線蟲幼蟲的活力的方法為：當所述線蟲幼蟲為藍色或淡藍色時，判定所述線蟲幼蟲為死亡或低活力幼蟲；當所述線蟲幼蟲為未染色狀態時，判定所述線蟲幼蟲為高活力幼蟲。