[發(fā)明專利]程序化框架gRNA及其應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202010438038.2 | 申請(qǐng)日： | 2020-05-21 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN111613272B | 公開(kāi)（公告）日： | 2023-10-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陸志科;馬麗佳;宋慶凱 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 西湖大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | G16B30/00 | 分類號(hào)： | G16B30/00;G16B50/30 |
| 代理公司： | 中國(guó)貿(mào)促會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 11038 | 代理人： | 陳曉娜 |
| 地址： | 310024 浙江省*** | 國(guó)省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說(shuō)明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 程序化 框架 grna 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種程序化框架gRNA，與親本框架gRNA相比，所述程序化框架gRNA在Tetraloop、Loop2和Tail中的任一結(jié)構(gòu)中引入腺嘌呤/鳥嘌呤(A/G)混合捕獲序列修飾，其中所述腺嘌呤/鳥嘌呤(A/G)混合捕獲序列選自SEQ ID No：1-9中的任一項(xiàng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的程序化框架gRNA，其中所述修飾為替換或插入，具體地，在Tetraloop和Loop2中的修飾為替換，即，用A/G混合捕獲序列替換Tetraloop或Loop2，在Tail中的修飾為插入，即，在Tail中插入A/G混合捕獲序列，更具體地，在Tail的polyT之前插入腺嘌呤/鳥嘌呤(A/G)混合捕獲序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的程序化框架gRNA，其中所述腺嘌呤/鳥嘌呤(A/G)混合捕獲序列的5’端和/或3’端帶有接頭序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的程序化框架gRNA，其中所述腺嘌呤/鳥嘌呤(A/G)混合捕獲序列選自SEQ ID No：1、3或7。
5.一種構(gòu)建權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的程序化框架gRNA的方法，所述方法包括在親本框架gRNA的Tetraloop、Loop2或Tail的任一個(gè)中引入腺嘌呤/鳥嘌呤(A/G)混合捕獲序列，其中腺嘌呤/鳥嘌呤(A/G)混合捕獲序列選自SEQ ID No：1-9中的任一項(xiàng)。
6.包含權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的程序化框架gRNA的載體。
7.一種gRNA表達(dá)盒，其在5’至3’方向依次包含啟動(dòng)子、tRNA和程序化框架gRNA，其結(jié)構(gòu)如式I所示，其中在啟動(dòng)子3’末端與程序化框架gRNA的5’末端(更具體地，為spacer序列的5’末端)之間添加tRNA：
其中從左至右為5’至3’方向，程序化框架gRNA表示權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的程序化框架gRNA。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的gRNA表達(dá)盒，其中所述啟動(dòng)子為Pol III啟動(dòng)子或Pol II啟動(dòng)子，優(yōu)選Pol III啟動(dòng)子，更優(yōu)選U6啟動(dòng)子，最優(yōu)選人U6啟動(dòng)子。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的gRNA表達(dá)盒，其中所述tRNA選自人tRNA(Gln)(SEQ ID No：14)或水稻tRNA(Gly)(SEQ ID No：15)。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的gRNA表達(dá)盒，其中所述啟動(dòng)子為U6啟動(dòng)子，并且所述tRNA選自人tRNA(Gln)(SEQ ID No：14)或水稻tRNA(Gly)(SEQ ID No：15)。
11.包含權(quán)利要求7-10中任一項(xiàng)所述的gRNA表達(dá)盒的載體。
12.一種雙gRNA表達(dá)盒，其在5’至3’方向包含啟動(dòng)子、框架gRNA、tRNA和程序化框架RNA，其中tRNA序列位于框架gRNA與程序化框架gRNA之間，所述雙gRNA表達(dá)盒的結(jié)構(gòu)如式II所示：
其中從左至右為5’至3’方向，框架gRNA表示未經(jīng)A/G混合捕獲序列修飾的框架gRNA，程序化框架gRNA表示權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的程序化框架gRNA。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的雙gRNA表達(dá)盒，其中所述啟動(dòng)子為Pol III啟動(dòng)子或Pol II啟動(dòng)子，優(yōu)選Pol III啟動(dòng)子，更優(yōu)選U6啟動(dòng)子，最優(yōu)選人U6啟動(dòng)子。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的雙gRNA表達(dá)盒，其中所述tRNA選自人tRNA(Gln)(SEQ IDNo：14)或水稻tRNA(Gly)(SEQ ID No：15)。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于西湖大學(xué)，未經(jīng)西湖大學(xué)許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購(gòu)買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請(qǐng)聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.17sss.com.cn/pat/books/202010438038.2/1.html，轉(zhuǎn)載請(qǐng)聲明來(lái)源鉆瓜專利網(wǎng)。
- 程序化快閃存儲(chǔ)單元的方法
- 自測(cè)試驅(qū)動(dòng)電路
- 一種電力調(diào)度程序化控制系統(tǒng)與方法
- 數(shù)據(jù)存儲(chǔ)方法、存儲(chǔ)器控制電路單元與存儲(chǔ)器存儲(chǔ)裝置
- 數(shù)據(jù)存儲(chǔ)方法、存儲(chǔ)器控制電路單元及存儲(chǔ)器存儲(chǔ)裝置
- 存儲(chǔ)器管理方法、存儲(chǔ)器控制電路單元及存儲(chǔ)器儲(chǔ)存裝置
- NAND型閃存及其程序化方法
- 基于變電站數(shù)據(jù)通信網(wǎng)關(guān)機(jī)的主子站遠(yuǎn)方程序化控制方法
- 數(shù)據(jù)編碼方法、存儲(chǔ)器控制電路單元與存儲(chǔ)器存儲(chǔ)裝置
- 監(jiān)測(cè)程序化廣告透明度的方法及設(shè)備
- 5’端不受堿基限制的gRNA的制備方法
- 雙gRNA、雙gRNA文庫(kù)、雙gRNA載體文庫(kù)及其制備方法和應(yīng)用
- 從頭合成的核酸文庫(kù)
- 一種質(zhì)粒載體及其構(gòu)建方法與應(yīng)用
- 一種雙重gRNA的基因表達(dá)元件及其構(gòu)建方法與應(yīng)用
- 一種團(tuán)頭魴MSTNab基因敲除的gRNA及其模板
- 一種在黃顙魚中雙gRNA位點(diǎn)敲除amh基因的方法及應(yīng)用
- 一種在黃顙魚中雙gRNA位點(diǎn)敲除dmrt1基因的CRISPR/Cas9系統(tǒng)及應(yīng)用
- 程序化框架gRNA及其應(yīng)用
- 靶向CTGF基因的gRNA及其應(yīng)用
