本發(fā)明公開(kāi)了一種評(píng)估肝內(nèi)膽管癌預(yù)后的分子標(biāo)志物、試劑盒及方法。評(píng)估肝內(nèi)膽管癌預(yù)后的分子標(biāo)志物為肝內(nèi)膽管癌組織中的ALKBH5蛋白，該蛋白的表達(dá)量與肝內(nèi)膽管癌的預(yù)后良好成正相關(guān)。評(píng)估肝內(nèi)膽管癌預(yù)后的試劑盒含有ALKBH5蛋白表達(dá)量的檢測(cè)相關(guān)試劑。評(píng)估肝內(nèi)膽管癌預(yù)后的方法包括以下步驟：1)檢測(cè)肝內(nèi)膽管癌組織切片中ALKBH5蛋白的表達(dá)量；2)與預(yù)先設(shè)定的ALKBH5蛋白表達(dá)量閾值做比較，高于閾值評(píng)定為患者預(yù)后良好，否則評(píng)定為患者預(yù)后不佳。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種評(píng)估肝內(nèi)膽管癌預(yù)后的分子標(biāo)志物、試劑盒及方法。

背景技術(shù)

肝內(nèi)膽管癌(intrahepatic?cholangiocarcinoma，ICC)是一種高度惡性的膽管癌亞型，起源于肝內(nèi)膽管上皮，是發(fā)病率僅次于肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular?carcinoma，HCC)的肝臟原發(fā)惡性腫瘤，約占肝臟原發(fā)惡性腫瘤的10-15％，近年來(lái)發(fā)病率和致死率均呈上升趨勢(shì)。臨床上，手術(shù)切除是早期肝內(nèi)膽管癌的唯一治療方法。但是由于肝內(nèi)膽管癌癥狀十分隱匿，發(fā)現(xiàn)時(shí)多已晚期，錯(cuò)過(guò)手術(shù)的最佳時(shí)期。并且由于手術(shù)切除復(fù)發(fā)率極高(術(shù)后第一年發(fā)病率50％)，患者預(yù)后很差。晚期或不可手術(shù)切除的膽管癌患者，標(biāo)準(zhǔn)化療方案僅限于吉西他濱和順鉑，且效果有限，總的中位生存率小于1年，目前尚無(wú)已批準(zhǔn)的二線治療藥物，缺乏有效治療手。近年來(lái)，肝內(nèi)膽管癌中分子靶向治療藥物(靶向酪氨酸激酶等)的臨床試驗(yàn)沒(méi)有取得理想的結(jié)果，尋找新的治療方法以延長(zhǎng)患者生存時(shí)間是一個(gè)亟待解決的科學(xué)難題。

在生理狀態(tài)下，RNA?m6A甲基化修飾已被證明在組織發(fā)育與干細(xì)胞自我更新和分化、晝夜節(jié)律調(diào)節(jié)、調(diào)節(jié)T細(xì)胞穩(wěn)態(tài)等很多正常生物過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。RNA?m6A甲基化修飾異常在癌癥的發(fā)生發(fā)展中也扮演了重要角色。RNA?m6A甲基化修飾在ICC或膽管癌中的作用尚無(wú)報(bào)道。

ALKBH5(alkB?homolog?5)是第二個(gè)發(fā)現(xiàn)的重要的m6A去甲基化酶。已有ALKBH5參與癌癥調(diào)控的報(bào)道：ALKBH5通過(guò)維持Foxm1表達(dá)和細(xì)胞增殖程序來(lái)維持膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞的致瘤性；通過(guò)減少長(zhǎng)鏈非編碼RNA?Kcnk15-As1甲基化來(lái)抑制胰腺癌的轉(zhuǎn)移；通過(guò)促進(jìn)Nanog?mRNA的m6A去甲基化增強(qiáng)缺氧誘導(dǎo)的乳腺癌干細(xì)胞表型。然而，ALKBH5在肝內(nèi)膽管癌中的作用尚未闡明，ALKBH5與肝內(nèi)膽管癌患者預(yù)后的關(guān)系也沒(méi)有相關(guān)研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)肝內(nèi)膽管癌復(fù)發(fā)率高的問(wèn)題，本發(fā)明旨在提供一種評(píng)估肝內(nèi)膽管癌預(yù)后的分子標(biāo)志物，該分子標(biāo)志物也是ALKBH5的一種新的應(yīng)用。

本發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研究，首次發(fā)現(xiàn)采用免疫組化方法檢測(cè)ALKBH5蛋白在人肝內(nèi)膽管癌組織中的表達(dá)量，能夠判斷肝內(nèi)膽管癌患者預(yù)后。

本發(fā)明的第一方面，提供了一種評(píng)估肝內(nèi)膽管癌預(yù)后的分子標(biāo)志物，所述分子標(biāo)志物為ALKBH5蛋白。

進(jìn)一步，所述分子標(biāo)志物為肝內(nèi)膽管癌組織中的ALKBH5蛋白，該蛋白的表達(dá)量與肝內(nèi)膽管癌的預(yù)后良好成正相關(guān)。

優(yōu)選地，所述預(yù)后包括檢測(cè)、療效評(píng)估、復(fù)發(fā)監(jiān)控。

本發(fā)明第二方面，提供了所述評(píng)估肝內(nèi)膽管癌預(yù)后的分子標(biāo)志物在制備評(píng)估肝內(nèi)膽管癌預(yù)后的試劑或試劑盒中的應(yīng)用。

優(yōu)選地，所述試劑或試劑盒采用免疫組化方法檢測(cè)ALKBH5蛋白在肝內(nèi)膽管癌組織中的表達(dá)量。

進(jìn)一步，本發(fā)明提供了一種評(píng)估肝內(nèi)膽管癌預(yù)后的試劑盒，所述試劑盒包括ALKBH5蛋白表達(dá)量的檢測(cè)相關(guān)試劑。

優(yōu)選地，所述評(píng)估肝內(nèi)膽管癌預(yù)后的試劑盒包括ALKBH5的單克隆抗體或多克隆抗體。

可選地，所述ALKBH5多克隆抗體為SIGMA公司的產(chǎn)品，貨號(hào)為HPA007196。

優(yōu)選地，所述評(píng)估肝內(nèi)膽管癌預(yù)后的試劑盒包括免疫組化試劑。