[發明專利]一種低高聚體含量聚合血紅蛋白的制備方法有效
| 申請號： | 202010198827.3 | 申請日： | 2020-03-20 |
| 公開（公告）號： | CN111217904B | 公開（公告）日： | 2022-04-19 |
| 發明（設計）人： | 游可為;史國營;張彥鵬;石松;陳浩源 | 申請（專利權）人： | 潤方（北京）生物醫藥研究院有限公司;潤方（北京）生物科技有限公司;游可為 |
| 主分類號： | C07K14/805 | 分類號： | C07K14/805;C07K14/415;C07K19/00;A01N1/02 |
| 代理公司： | 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038 | 代理人： | 崔錫強 |
| 地址： | 101149 北京市大興*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 低高聚體 含量 聚合 血紅蛋白 制備 方法 | ||
1.一種交聯血紅蛋白的制備方法，其包括如下步驟：
a、稀釋脫氧的血紅蛋白到X1；向所述稀釋脫氧的血紅蛋白中加入終濃度為X2的N-乙酰-L-半胱氨酸，得到反應液；將所述反應液移到無氧反應容器內；
b、在所述無氧反應容器頂部固定壓力霧化器，在所述霧化器上接入進氣管與進液管，在所述無氧反應容器頂部接上平衡氣管路；封閉所述無氧反應容器，開啟底部攪拌轉子，通過水浴夾套加熱所述反應液到42℃；打開進液管閥門，加入交聯劑戊二醛，調整進液速度為X3，打開進氣管閥門，通入惰性氣體，調控所述平衡氣管路上的排氣閥，使所述無氧反應容器的壓力平衡在X4，按1g血紅蛋白X5戊二醛的比例向所述反應液中加入所述交聯劑戊二醛進行交聯反應；
c、加入硼氫化鈉終止所述交聯反應，30kD超濾換液純化，得到所述交聯血紅蛋白；
其中，所述X1、X2、X3、X4和X5選自以下組合之一：
2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述惰性氣體為高純氮氣。
3.一種交聯血紅蛋白的制備方法，其包括如下步驟：
a、稀釋脫氧的血紅蛋白到2g/dL；向所述稀釋脫氧的血紅蛋白中加入終濃度為3mg/mL的N-乙酰-L-半胱氨酸，得到反應液；將所述反應液移到無氧反應容器內；
b、封閉所述無氧反應容器，開啟底部攪拌轉子，通過水浴夾套加熱所述反應液到42℃；在反應系統的循環管路中放置靜態混合器，在靜態混合器處設置分支管路加入交聯劑戊二醛，使所述血紅蛋白和所述交聯劑在所述靜態混合器處充分混合，交聯劑加入速度為100mL/min，向所述無氧反應容器中通入惰性氣體，按1g血紅蛋白37mg戊二醛的比例向所述反應液中加入所述交聯劑戊二醛進行交聯反應；
c、加入硼氫化鈉終止所述交聯反應，30kD超濾換液純化，得到所述交聯血紅蛋白。
4.根據權利要求3所述的方法，其中，所述惰性氣體為高純氮氣。
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