[發(fā)明專利]一種頭孢菌素C生產(chǎn)菌及其制備方法與應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202010180523.4 | 申請(qǐng)日： | 2020-03-16 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN112852907B | 公開(kāi)（公告）日： | 2021-11-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 孫周通;楊大猛 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國(guó)科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所 |
| 主分類號(hào)： | C12P21/02 | 分類號(hào)： | C12P21/02;C12P35/06;C12P37/00;C12N15/81 |
| 代理公司： | 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 | 代理人： | 白艷 |
| 地址： | 300308 天津*** | 國(guó)省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 頭孢菌素 生產(chǎn) 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種制備頭孢菌素C的方法，包括如下步驟：在酵母菌中引入頭孢菌素C合成途徑，得到重組菌，發(fā)酵所述重組菌，得到頭孢菌素C；
所述引入頭孢菌素C合成途徑包括如下步驟：
1）引入ACV三肽合成酶，和，磷酸泛酰巰基乙胺基轉(zhuǎn)移酶，使所述磷酸泛酰巰基乙胺基轉(zhuǎn)移酶能激活所述ACV三肽合成酶催化所述酵母菌中的L-α-氨基己二酸、L-半胱氨酸和L-纈氨酸合成ACV三肽；
2）引入異青霉素N合酶IPNS，使該酶能催化所述ACV三肽合成異青霉素N；
3）引入異青霉素N差向異構(gòu)酶IPNE，使該酶能催化所述異青霉素N合成青霉素N；
4）引入脫乙酰氧頭孢菌素C合成酶DAOCS、脫乙酰頭孢菌素C合成酶DACS和脫乙酰頭孢菌素C乙酰轉(zhuǎn)移酶DAC-AT，使這些酶能催化所述青霉素N合成頭孢菌素C；
所述發(fā)酵采用培養(yǎng)基中含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%葡萄糖和質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%半乳糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述頭孢菌素C合成途徑為異源頭孢菌素C合成途徑；
所述ACV三肽合成酶來(lái)源于Symbiodinium microadriaticum或Streptomycesclavuligerus；
或，所述異青霉素N差向異構(gòu)酶IPNE來(lái)源于Streptomyces clavuligerus或Amycolatopsislactamdurans或Pseudomonas protegens或Janthinobacterium sp. HH01或Streptomyces reticuli。
3.根據(jù)根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述磷酸泛酰巰基乙胺基轉(zhuǎn)移酶來(lái)源于Aspergillus nidulans；
或，所述異青霉素N合酶IPNS來(lái)源于Acremonium chrysogenum或Amycolatopsislactamdurans或Flavobacterium sp.或Streptomyces jumonjinensis或Penicillium chrysogenum或Streptomyces cattleya或Streptomyces clavuligerus或Lysobacter lactamgenus或Streptomyces griseus或Streptomyces microflavus或Emericella nidulans；
或，所述脫乙酰氧頭孢菌素C合成酶擴(kuò)環(huán)酶DAOCS和脫乙酰頭孢菌素C合成酶羥化酶DACS均來(lái)源于Acremonium chrysogenum或Pochonia chlamydosporia 170。
或，所述脫乙酰頭孢菌素C乙酰轉(zhuǎn)移酶DAC-AT來(lái)源于Acremonium chrysogenum或Talaromyces stipitatus或Rasamsonia emersonii或Byssochlamys spectabilis或Acremonium chrysogenum。
4.根據(jù)根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述酵母菌含有L-α-氨基己二酸、L-半胱氨酸和L-纈氨酸的合成途徑；
或，所述酵母菌為釀酒酵母、啤酒酵母、葡萄汁酵母、漢遜酵母、球擬酵母、假絲酵母、畢赤酵母、紅酵母或棉病針酵母。
5.根據(jù)根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述在酵母菌中引入頭孢菌素C合成途徑的方法包括如下步驟：使所述酵母菌表達(dá)7種酶的外源基因，得到的引入該途徑的重組菌；
所述7種酶為所述ACV三肽合成酶、所述磷酸泛酰巰基乙胺基轉(zhuǎn)移酶、所述異青霉素N合酶IPNS、所述異青霉素N差向異構(gòu)酶IPNE、所述脫乙酰氧頭孢菌素C合成酶DAOCS、所述脫乙酰頭孢菌素C合成酶DACS和所述脫乙酰頭孢菌素C乙酰轉(zhuǎn)移酶DAC-AT。
6.根據(jù)根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于：
所述使酵母菌表達(dá)7種酶的外源基因?yàn)閷⑺?種酶的外源基因均以質(zhì)粒形式存在所述酵母菌中進(jìn)行表達(dá)。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于中國(guó)科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所，未經(jīng)中國(guó)科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購(gòu)買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請(qǐng)聯(lián)系【客服】
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