[發明專利]用于檢測尿液中微量觸珠蛋白的化學發光試劑盒及方法在審
| 申請號： | 202010178072.0 | 申請日： | 2020-03-14 |
| 公開（公告）號： | CN111323601A | 公開（公告）日： | 2020-06-23 |
| 發明（設計）人： | 楊金奎;陳興;楊芳遠;楊艷慧 | 申請（專利權）人： | 北京市糖尿病研究所;石家莊和亞生物技術有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/543;G01N21/76 |
| 代理公司： | 石家莊冀科專利商標事務所有限公司 13108 | 代理人： | 孟玉寒 |
| 地址： | 100730 北京*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 檢測 尿液 微量 珠蛋白 化學 發光 試劑盒 方法 | ||
1.一種用于檢測尿液中微量觸珠蛋白的化學發光試劑盒，其特征在于：所述化學發光試劑盒采用雙單抗夾心法檢測尿液中的微量觸珠蛋白，所述化學發光試劑盒包括化學發光板、酶標單抗溶液、標準品溶液和發光底物，所述化學發光板采用稀釋后的單克隆抗體5C4包被，并采用封閉液封閉，所述酶標單抗溶液包括單克隆抗體1A2和抗體稀釋液，所述單克隆抗體5C4和單克隆抗體1A2為可識別人類天然Hp分子結構表位的單克隆抗體。
2.根據權利要求1所述的用于檢測尿液中微量觸珠蛋白的化學發光試劑盒，其特征在于：所述單克隆抗體5C4為IgG2aλ型抗體；所述單克隆抗體1A2為IgG1κ型抗體。
3.根據權利要求2所述的用于檢測尿液中微量觸珠蛋白的化學發光試劑盒，其特征在于：所述化學發光板的制備過程包括包被、封閉和干燥密封，具體步驟為：采用50mM、pH＝9.6的碳酸鹽緩沖液作為包被液，將單克隆抗體5C4稀釋至3μg/mL，化學發光板的每個微孔中加入100μL稀釋后的單克隆抗體5C4，37℃靜置4h；封閉液為包含1.2％BSA、0.1％酪蛋白及0.1％Proclin300的20mM pH＝7.4的PBS緩沖液，包被后的化學發光板經洗滌后，每孔加入封閉液120μL，37℃靜置2h；封閉后的發光板加干燥劑密封處理，即得到包被的化學發光板。
4.根據權利要求3所述的用于檢測尿液中微量觸珠蛋白的化學發光試劑盒，其特征在于：所述酶標單抗溶液中單克隆抗體1A2和抗體稀釋液的稀釋比例為1:3000，所述抗體稀釋液為20mM、pH＝7.4的PBS緩沖液，其包括3％的BSA、0.8％氯化鈉、0.01％氯化鉀及0.1％Proclin300。
5.根據權利要求4所述的用于檢測尿液中微量觸珠蛋白的化學發光試劑盒，其特征在于：所述標準品溶液由已知濃度可溯源的Hp蛋白經過標準品稀釋液稀釋而成，所述標準品稀釋液為20mM、pH＝7.4的PBS緩沖液，包括1％BSA、0.8％氯化鈉、2％新生牛血清和0.1％Proclin300。
6.根據權利要求5所述的用于檢測尿液中微量觸珠蛋白的化學發光試劑盒，其特征在于：所述發光底物由A液和B液按體積比1:1混合制成，所述A液制備過程為：稱取BSA 6mg和甘氨酸14mg，溶解于200mL，pH＝8.5，0.1M Tris-HCl溶液中，加入0.02M的魯米諾溶液10mL，0.1M過碘酚1mL；溶解后混勻4℃避光保存；
所述B液制備過程為：稱取過氧化脲48mg，溶解于200mL，pH＝8.5，0.1M Tris-HCl溶液中，加入Triton X-100 0.5mL；溶解后混勻，4℃避光保存。
7.一種尿液中微量觸珠蛋白的檢測方法，其特征在于：利用如權利要求1至6任一項所述的化學發光試劑盒檢測尿液中微量觸珠蛋白，所述檢測方法為雙單抗夾心法，包括如下步驟：向利用稀釋后的單克隆抗體5C4包被后的化學發光板每孔加入待測樣本或者標準品溶液25μL，再向微孔中加入100μL的制備好的酶標單抗溶液，混勻，37℃溫育60min，用PBST洗板五次，按體積比為1:1分別加入的發光底物A液和B液，避光反應3分鐘后上機測定發光值；根據測定的發光值與Hp含量標準曲線，計算得到Hp的含量。
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