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[發(fā)明專利]一種用于提高綠藻產(chǎn)油的化學(xué)誘導(dǎo)劑的篩選方法及其應(yīng)用有效

專利信息
申請(qǐng)?zhí)枺?/td> 202010151260.4 申請(qǐng)日: 2020-03-06
公開(公告)號(hào): CN111440727B 公開(公告)日: 2022-10-21
發(fā)明(設(shè)計(jì))人: 魏東;陳俊輝 申請(qǐng)(專利權(quán))人: 華南理工大學(xué)
主分類號(hào): C12N1/12 分類號(hào): C12N1/12;C12N1/38;G01N33/50;G01N21/64;C12R1/89
代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245 代理人: 劉瑜
地址: 510640 廣*** 國省代碼: 廣東;44
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 一種 用于 提高 綠藻 產(chǎn)油 化學(xué) 誘導(dǎo)劑 篩選 方法 及其 應(yīng)用
【權(quán)利要求書】:

1.一種用于提高綠藻產(chǎn)油的化學(xué)誘導(dǎo)劑的篩選方法,其特征在于,包括如下步驟:

S1、初篩誘導(dǎo)培養(yǎng):將活化的綠藻細(xì)胞接種至無氮含糖培養(yǎng)基中并分成n份,然后分別加入濃度為C1,C2……Cn的化學(xué)誘導(dǎo)劑進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng),依次得到誘導(dǎo)劑組綠藻細(xì)胞A1,A2……An,同時(shí)在相同條件下以不加入化學(xué)誘導(dǎo)劑為對(duì)照,得到對(duì)照組綠藻細(xì)胞;其中n ≥ 2,且為整數(shù);濃度C1 C2……Cn

S2、MFI值測(cè)定:采用流式細(xì)胞儀分別測(cè)定步驟S1中得到的誘導(dǎo)劑組綠藻細(xì)胞A1,A2……An以及對(duì)照組綠藻細(xì)胞內(nèi)葉綠素的平均熒光強(qiáng)度,依次得到誘導(dǎo)劑組綠藻細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度值MFI1、MFI2……MFIn,以及對(duì)照組綠藻細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度值MFI0

S3、初篩判斷:

①若MFI1 ≥ MFI0,則說明該化學(xué)誘導(dǎo)劑在濃度為C1時(shí)能夠提高綠藻細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)油量,反之,若MFI1<MFI0,則說明該化學(xué)誘導(dǎo)劑在濃度為C1時(shí)不能提高綠藻細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)油量;同理,若MFI2≥MFI0,則說明該化學(xué)誘導(dǎo)劑在濃度為C2時(shí)能夠提高綠藻細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)油量,若MFI2<MFI0,則說明該化學(xué)誘導(dǎo)劑在濃度為C2時(shí)不能提高綠藻細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)油量;以此類推,若MFIn≥MFI0,則說明該化學(xué)誘導(dǎo)劑在濃度為Cn時(shí)能夠提高綠藻細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)油量,反之,若MFIn<MFI0,則說明該化學(xué)誘導(dǎo)劑在濃度為Cn時(shí)不能提高綠藻細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)油量;

和/或,

②將MFI1、MFI2……MFIn進(jìn)行排序,取最大值,命名為MFIx,并獲得與MFIx相對(duì)應(yīng)的化學(xué)誘導(dǎo)劑的濃度,命名為Cx;若MFIx≥MFI0,則說明該化學(xué)誘導(dǎo)劑在濃度為Cx時(shí)能夠提高綠藻細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)油量,以該濃度為化學(xué)誘導(dǎo)劑的最佳誘導(dǎo)濃度;若MFIx<MFI0,則說明該化學(xué)誘導(dǎo)劑對(duì)綠藻細(xì)胞產(chǎn)油量無誘導(dǎo)刺激作用效果;

步驟S1中所述的綠藻為佐夫色綠藻;

步驟S1中所述的化學(xué)誘導(dǎo)劑為過氧化氫,丁基羥基苯甲醚,2,6-二叔丁基對(duì)甲酚,三甲基甘氨酸,原釩酸鈉,草甘膦,丙酮酸,檸檬酸,蘋果酸,α-酮戊二酸,氯化鎂和氯化鉀中的一種以上;

步驟S2中所述的平均熒光強(qiáng)度值為采用流式細(xì)胞儀測(cè)定藻細(xì)胞在FL3通道的平均熒光強(qiáng)度值;其中,F(xiàn)L3通道的光譜范圍為 670 nm;

所述的用于提高綠藻產(chǎn)油的化學(xué)誘導(dǎo)劑的篩選方法,在步驟S3之后還包括復(fù)篩的步驟;具體如下:

(I)將活化的綠藻細(xì)胞接種至無氮含糖培養(yǎng)基中,然后以步驟S3中獲得的化學(xué)誘導(dǎo)物的最佳濃度作為化學(xué)誘導(dǎo)物的濃度,對(duì)綠藻細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),同時(shí)以不加入化學(xué)誘導(dǎo)劑為對(duì)照,得到誘導(dǎo)劑組綠藻細(xì)胞和對(duì)照組綠藻細(xì)胞;

(II)培養(yǎng)結(jié)束后測(cè)定誘導(dǎo)劑組綠藻細(xì)胞的油脂的含量H1以及對(duì)照組綠藻細(xì)胞的油脂的含量H2,和/或測(cè)定誘導(dǎo)劑組綠藻細(xì)胞的油脂的產(chǎn)量Y1以及對(duì)照組綠藻細(xì)胞的油脂的產(chǎn)量Y2

(II)若Y1 Y2和/或H1 H2,則確定該化學(xué)誘導(dǎo)劑為可用于提高綠藻細(xì)胞的產(chǎn)油量的化學(xué)誘導(dǎo)劑;

步驟S1中所述的綠藻細(xì)胞的接種密度為2~3 g/L;

步驟S1中所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)的條件為:轉(zhuǎn)速50~500 rpm,培養(yǎng)溫度20~30 ?C,采用白光光源,光照300 ± 30 μmol m-2 s-1,培養(yǎng)時(shí)間12天以上。

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