本發(fā)明公開(kāi)了一種快速檢測(cè)七種冠狀病毒和其他呼吸道病原體的探針及引物組合物，主要是根據(jù)OC43?CoV、NL63?CoV、229E?CoV、HKU1?CoV、SARS?CoV、FluB、RSV的N基因；MERS?CoV的ORF1a、ORF1b、N基因；2019?nCoV的ORF1ab、N基因；FluA的M基因；HadV的HEXON基因的特異性設(shè)計(jì)一組特異性引物及Taqman或MGB探針，利用熔解曲線技術(shù)，根據(jù)熔解溫度的變化快速鑒定CoV?OC43、HCoV?NL63、HCoV?229E、HCoV?HKU1、SARS?CoV、MERS?CoV、2019?nCoV、FluA、FluB、HAdV、RSV。該設(shè)計(jì)能夠?qū)崿F(xiàn)一個(gè)熒光通道中同時(shí)檢測(cè)多種病原體，并能夠滿足較高的靈敏度。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于核酸檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)冠狀病毒OC43、冠狀病毒NL63、冠狀病毒229E、冠狀病毒HKU1、SARS冠狀病毒、MERS冠狀病毒、新型冠 狀病毒(2019-nCoV)、甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病 毒的試劑盒及檢測(cè)方法領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

冠狀病毒(Coronavirus，CoV)屬巢狀病毒目，冠狀病毒科，是一類有包 膜的正鏈RNA病毒，全長(zhǎng)在26-32kb之間，分為α、β、γ三個(gè)屬。α、β屬僅 對(duì)哺乳動(dòng)物致病，γ屬主要引起鳥(niǎo)類感染，CoV主要通過(guò)直接接觸分泌物或經(jīng)氣 溶膠、飛沫傳播，也有證據(jù)表明可經(jīng)糞口途徑傳播。冠狀病毒在自然界的感染 譜非常廣泛，常見(jiàn)的哺乳類動(dòng)物如犬、貓、鼠、豬、牛及家禽類等都易感。近 年來(lái)，又從白鯨、駱駝、蝙蝠體內(nèi)分離到多種類型的冠狀病毒。到目前為止， 引起人類呼吸道疾病的人冠狀病毒(HCoV)已達(dá)7種：HCoV-OC43、HCoV-NL63、 HCoV-229E、HCoV-HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV和新型冠狀病毒(2019-nCoV)， 是人呼吸道感染的重要病原體。其中，2019-nCoV于2019年被發(fā)現(xiàn)，臨床表現(xiàn)為 發(fā)熱、乏力等全身癥狀，伴有干咳，呼吸困難等，可迅速發(fā)展為重癥肺炎、呼 吸衰竭、急性呼吸窘迫綜合征，膿毒性休克，多器官功能衰竭，嚴(yán)重酸堿代謝 紊亂等，甚至危及生命。

流感是由流感病毒引起急性呼吸道傳染病，主要傳播方式是空氣飛沫傳播。 流感病毒分為甲型、乙型和丙型。甲型流感病毒(Influenza A virus，F(xiàn)luA) 根據(jù)表面血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)的不同分為16個(gè)HA亞型和9個(gè)NA亞型， 甲型流感病毒最容易發(fā)生變異，容易引起爆發(fā)流行；乙型流感病毒(Influenza B virus，F(xiàn)luB)變異較少，丙型流感病毒較穩(wěn)定，多引起散發(fā)病例。流感是一 種季節(jié)性疾病，在溫帶地區(qū)，流感會(huì)在整個(gè)冬季流行，在熱帶地區(qū)，流感病毒 一年四季均存在，雨季流行多見(jiàn)。一般來(lái)說(shuō)，僅約50％左右的感染病人會(huì)發(fā)展成 典型流感臨床癥狀。流感典型癥狀以突然發(fā)熱、頭暈頭痛、肌痛為特點(diǎn)，同時(shí)可伴有喉嚨痛和咳嗽、鼻塞、流涕、胸痛、眼痛、畏光等癥狀。發(fā)熱體溫可達(dá) 39～40℃，一般持續(xù)2～3天后漸退。甲型和乙型流感的臨床癥狀相似，乙型流 感通常有肌炎及胃腸道癥狀。

人腺病毒(Human adenoviruses,HAdV)屬于哺乳動(dòng)物腺病毒屬，是一群分 布廣泛的、無(wú)包膜的雙鏈DNA病毒，1953年由Rowe等首次發(fā)現(xiàn)。目前已發(fā)現(xiàn)至 少90個(gè)基因型，分為A-G共7個(gè)亞屬，不同型別HAdV的組織嗜性、致病力、流行 地區(qū)等特性不同。HAdV感染可引起多種疾病，包括肺炎、支氣管炎、膀胱炎、 眼結(jié)膜炎、胃腸道疾病及腦炎等。與呼吸道感染相關(guān)的HAdV主要有B亞屬 (HAdV-3、7、11、14、16、21、50、55型)，C亞屬(HAdV-1、2、5、6、57 型)和E亞屬(HAdV-4型)。腺病毒肺炎約占社區(qū)獲得性肺炎的4％-10％，重癥 肺炎以3型及7型多見(jiàn)，HAdV-7B型是2019年我國(guó)南方發(fā)病地區(qū)主要流行株。