本發明涉及一種新型冠狀病毒的人源單克隆抗體及其應用。該抗體能夠特異性結合2019?nCoV RBD，阻斷2019?nCoV RBD與ACE2結合，抑制2019?nCoV感染。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種高中和活性的新型冠狀病毒 (2019-nCoV)人源單克隆抗體及其應用。

背景技術

新型冠狀病毒2019-nCoV作為新發的突發傳染病病原，目前還沒有針對該病毒的特效藥物獲批上市。

治療性抗體藥物不但在腫瘤和自身免疫疾病方面占有重要地位，在傳染性疾病的治療中也同樣有效。目前已經上市的治療和預防病毒感染的藥物有預防小兒呼吸道合胞病毒(RSV)感染的帕利珠單抗(Synagis)，治療 HIV感染的艾巴利珠單抗(Trogarzo)，以及用于狂犬病毒暴露后預防的 Rabishield。同時還有針對眾多病毒的單克隆抗體處于臨床研究的不同階段 (https：//clinicaltrials.gov/)。

2019-nCoV屬于冠狀病毒。同屬冠狀病毒的重癥急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS-CoV)以及中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)也曾在分別在2002-2003年和2012年引發疫情。據世界衛生組織(WHO)統計 SARS-CoV共引發8000人感染，794人死亡(https：//www.who.int/)。自 2012年至今，MERS-CoV感染病毒病例在持續增加，截至2019年底，全球確診2499例感染病例，861例死亡病例。2020年1月12日，世界衛生組織正式命名了“2019新型冠狀病毒(2019-nCoV)”，其后在2020年2 月11-12日國際病毒分類委員會(International Committee on Taxonomy of Viruses，ICTV)宣布，新型冠狀病毒(2019-nCoV)的正式分類名為嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒2(severe acute respiratorysyndrome coronavirus 2， SARS-CoV-2)，世界衛生組織(WHO)同日在日內瓦舉辦全球研究和創新論壇上宣布，由這一病毒導致的疾病的正式名稱為“COVID-19”。

病毒要感染細胞，首先需要通過囊膜蛋白結合宿主的受體。抗體，尤其是中和活性抗體，通過結合到囊膜蛋白上，阻斷病毒與細胞受體的結合，從而阻斷病毒感染。同時，抗體結合到囊膜蛋白上，從而對游離的病毒或是被感染的細胞進行標記，通過抗體的Fc區募集巨噬細胞或是補體等免疫細胞和免疫分子，從而清除游離的病毒以及被感染的細胞。因此，靶向受體結合區(RBD)的抗體，不但具有中和病毒感染的活性，還可以通過 Fc區發揮作用，促進病毒以及被感染細胞的清除。

基于對其它冠狀病毒，尤其是SARS-CoV和MERS-CoV的研究，與受體結合的重要囊膜蛋白是刺突蛋白(S)。S可進一步分為S1和S2兩部分。S2的作用是介導膜融合。S1的N端(NTD)和C端(CTD)都可能是RBD。通過對2019-nCoV的研究，團隊發現CTD是此冠狀病毒的RBD，結合受體ACE2。因此靶向RBD的抗體，并且是阻斷S與ACE2結合的抗體，可能成為抑制病毒感染的中和抗體。本發明的目的是針對2019-nCoV，鑒定特異的具有保護效果的人源中和抗體。

發明內容

為了獲得具有保護效果的人源中和抗體，本發明首先以昆蟲細胞表達的2019-nCoV RBD作為抗原，通過流式分選，從2019-nCoV RBD感染后痊愈出院人員的PBMCs中篩選到可以特異結合2019-nCoV RBD蛋白的記憶B細胞，然后對篩選的單一B細胞進行RT-PCR，獲得抗體的可變區序列與片段，并進一步與恒定區連接至表達載體中。經哺乳動物細胞表達、純化后，進行一系列的功能檢測，包括與2019-nCoV RBD蛋白的結合能力，阻斷2019-nCoVRBD與ACE2結合的阻斷效果，抑制2019-nCoV感染的中和效果等，獲得了中和2019-nCoV感染的人源單克隆抗體，命名為 CA1。

具體地，本發明通過以下方面實現。