本發明提供一種大胡蜂肽及其制備方法和應用，屬于生化藥物制備技術領域，本發明以大胡蜂毒腺分泌物的凍干粉末為原料，通過陽離子交換高效液相色譜、陰離子交換高效液相色譜以及反相高效液相色譜共三步分離獲得的WVF?Ⅰ，運用質譜鑒定純度達到98％以上，其分子量約為1499Da。

技術領域

本發明涉及生化藥物制備技術領域，尤其涉及一種大胡蜂肽及其制備方法和應用。

背景技術

生物毒素是生物活性最高、毒性最大的化學物質，對探索生命運動過程和發展新藥均有重要價值。

缺血性中風作為中風病的常見疾病癥型之一，以偏癱、失語等局灶性功能神經缺損為主要臨床特征，其中偏癱為中風病致殘的主要原因之一。中風偏癱又叫半身不遂，是指一側上下肢、面肌和舌肌下部的運動障礙，它是急性腦血管病的一個常見癥狀，是由于上運動神經元損害而致的中樞性癱瘓，中風病患者的生存、生活質量以及日常工作能力受到了嚴重影響。腦中風發病急，病死率高，是世界上最重要的致死性疾病之一。目前用于治療腦中風的藥物多為化學制劑，存在毒性和副作用大的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種大胡蜂肽及其制備方法和應用，該方法制備的大胡蜂肽能夠用于治療偏癱。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種大胡蜂肽WVF-Ⅰ，所述大胡蜂肽WVF-Ⅰ的氨基酸序列如SEQ?IDNO：1所示。

本發明還提供了上述方案所述大胡蜂肽WVF-Ⅰ的制備方法，包括以下步驟：

1)將大胡蜂毒腺分泌物的凍干粉末和水混合溶解，離心，取上清液得到毒素溶液；

2)將步驟1)所述毒素溶液上樣陽離子交換色譜柱進行第一純化，收集0～5min出現的洗脫峰對應的洗脫液對應的洗脫液，將洗脫液凍干得到第一凍干粉，第一凍干粉和雙蒸水混合溶解，得到第一純化物；

3)將步驟2)所述第一純化物上樣陰離子交換色譜柱進行第二純化，收集9～12min出現的洗脫峰對應的洗脫液對應的洗脫液，將洗脫液凍干得到第二凍干粉，第二凍干粉和雙蒸水混合溶解，得到第二純化物；

4)將步驟3)所述第二純化物上樣反向交換色譜柱進行第三純化，收集14～16min出現的洗脫峰對應的洗脫液，得到大胡蜂肽WVF-Ⅰ。

優選的，步驟1)中所述大胡蜂毒腺分泌物的凍干粉末的質量和水的體積比為4～6mg:0.5～1.5mL。

優選的，步驟2)中所述第一純化的條件包括：色譜柱為Agilent?Bio?WCX；柱溫為25℃；檢測器為W2998檢測器；檢測波長為280nm；流動相的流速為3mL/min；洗脫液分別為A相0.02M?NaH₂PO₄，B相0.02M?Na₂HPO₄，C相1M?NaCl，D相ddH₂O。

優選的，步驟2)中所述AgilentBio?WCX的內徑為4.6mm；所述Agilent?Bio?WCX的長度為250mm；所述Agilent?Bio?WCX的粒徑為10μm。

優選的，步驟3)中所述第二純化的條件包括：色譜柱為Bio?Suite^TM?DEAE；檢測器為DAD檢測器；柱溫為25℃；檢測波長為280nm；流動相的流速為0.8mL/min；洗脫液分別為A相0.02M?Tris-HCl，B相0.7M?NaCl。

優選的，步驟3)中所述Bio?Suite^TMDEAE的內徑為7.5mm；所述Bio?Suite^TMDEAE的長度為75mm；所述Bio?Suite^TMDEAE的粒徑為10μm。