本發明公開了一種利用葉綠體基因鑒定蒼術屬藥用物種白術(Atractylodes macrocephala)、茅蒼術(Atractylodes lancea)和北蒼術(Atractylodes chinensis)的引物及其應用，本發明通過SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2序列作引物，擴增白術、北蒼術、茅蒼術的葉綠體基因組序列，PCR條帶測序后對比發現，茅蒼術的目的條帶存在5bps的tatat插入突變、白術的目的條帶存在6bps的tcttac插入突變，本發明的葉綠體基因組分子標記成功區分了白術、北蒼術、茅蒼術三個種，為蒼術屬植物的遺傳多樣性、系統進化和分類學研究提供了技術手段。

技術領域

本方法涉及植物分子生物學領域，特別涉及了一種利用葉綠體基因鑒定蒼術屬藥用物種的引物及其應用。

背景技術

蒼術屬(菊科)分布于中國、韓國和日本的種有7種。很多蒼術屬物種的藥用價值早已為人們所知。根據臨床用途，其干的根莖可作為兩種中草藥使用，即中藥白術和中藥蒼術。在《中國藥典》、《韓國藥典》和《日本藥典》中，蒼術屬植物白術的干燥根狀莖被稱為白術，茅蒼術和北蒼術的干燥根狀莖被稱為蒼術。

中藥蒼術的基源植物可分為茅蒼術(南蒼術)和北蒼術，茅蒼術含揮發油約5～9％，油的主要成分為蒼術醇、茅術醇、β-桉葉醇等，茅蒼術呈不規則連珠狀或結節狀圓柱形，表面灰棕色，質堅實，斷面黃白色或灰白色，散有多數橙黃色或棕紅色油室，氣香特異，味微甘、辛、苦；茅蒼術具有燥濕健脾，祛風，散寒，明目功效。用于脘腹脹滿、泄瀉、水腫、腳氣痿辟、風濕痹痛、風寒感冒、雀目夜盲。

北蒼術含揮發油1.5％，其主要成分為蒼術醇、蒼術酮、茅術醇及桉葉醇等。北蒼術呈疙瘩塊狀，質較疏松，表面黑棕色，斷面散有黃棕色油室，香氣較淡，味辛、苦；北蒼術具有燥濕健脾，祛風，散寒，明目功效。用于脘腹脹滿，泄瀉，水腫，腳氣痿軟，風濕痹痛，風寒感冒，雀目夜盲等疾病。

白術歸脾、胃經，苦、甘，溫，具有健脾益氣，燥濕利水，止汗，安胎功效，可用于脾虛食少，腹脹泄瀉，痰飲眩悸，水腫，自汗，胎動不安。土白術健脾，和胃，安胎。用于脾虛食少，泄瀉便溏，胎動不安。

白術的根莖被歸類為藥材白術。在中藥中，白術和蒼術的藥理作用是不同的。白術引起發汗，蒼術會抑制發汗。最近的研究表明，蒼術屬物種的根狀莖還具有許多其他藥理作用，如抗菌、免疫調節、抗腫瘤和抗骨質疏松等，從而表明蒼術屬物種在新藥開發中具有相當大的潛力。

盡管蒼術屬物種被廣泛用作醫藥產品的基源植物，但其種類之間的分類關系仍存在爭議。白術和蒼術成分和功能上具有很大區別，而茅蒼術和北蒼術形態形似，用宏觀觀察來區分物種困難、易誤用，但其主要的化學成分、生物活性物質的含量及其種類均不相同，所以準確的品種鑒定是保證蒼術類藥材臨床安全性的關鍵。因此，需要一種準確的物種測定方法，以確保蒼術屬物種的藥用安全性和有效性。

近年來，許多分子識別方法得到了發展，普遍使用的DNA條形碼，如ITS和trnK基因，已被用于蒼術屬的物種鑒定和系統發育分析。然而，由于物種界限不清和分辨率低，這些標記在物種水平和種下水平上的表現并不令人滿意。因此，如何提供一種簡便、高效可區分蒼術屬物種的分子標記是本領域亟待解決的問題。

發明內容

本發明公開了一種利用葉綠體基因鑒定蒼術屬藥用物種的引物及其篩選方法。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種利用葉綠體基因鑒定蒼術屬藥用物種的引物，引物序列為:

cz11_F：AGAACCGTCACAATACGCCT；SEQ ID NO1；

cz11_R：AACGCCTACGAAAAGATCGC；SEQ ID NO2。

一種利用葉綠體基因和cz11_F/cz11_R引物，鑒定茅蒼術、白術、北蒼術的方法，包括以下步驟：