本發明屬于有機合成、熒光探針檢測技術領域，公開了一種用于檢測一氧化氮濃度的熒光探針及其合成方法和應用。熒光探針命名為AQA(包括熒光探針A：AQA?H、熒光探針B：AQA?OCH₃、熒光探針C：AQA?Cl、熒光探針D：AQA?Br)，熒光探針AQA的激發波長范圍在400～430nm、發射波長范圍在480～620nm，每種熒光探針均擁有較大的斯托克斯位移。在體外一氧化氮的檢測中，本發明熒光探針AQA與一氧化氮反應靈敏度高，熒光強度變化明顯。本發明篩選了AQA與NO的反應條件，發現在生理條件下(pH 7.4，25℃)AQA?OCH₃與NO的熒光響應最佳。

技術領域

本發明屬于有機合成、熒光探針檢測技術領域，本發明涉及一種用于檢測一氧化氮濃度的熒光探針及其合成方法和應用。

背景技術

一氧化氮是細胞內一種重要的信號分子。它廣泛分布于生物體內各個組織中，在心、腦血管調節，神經調節，免疫調節等方面起著十分重要的生物學作用。大量研究表明，nmol水平的一氧化氮主要引起細胞中毒,而p mol或f mol水平的一氧化氮則參與免疫及炎癥過程中的信息傳遞，因此對生物體內一氧化氮水平進行準確測定成為研究的焦點之一。有關生理、病理、藥理及臨床應用的研究都依賴于精確、可靠的一氧化氮測定方法。

由于熒光探針在檢測一氧化氮時具有靈敏度高、專一性強、響應速度快、受干擾離子/分子的影響程度小、原位檢測等優點，因此熒光探針技術已經發展成為動態監控活細胞及活體中一氧化氮的最重要手段。但現有用來檢測一氧化氮的熒光探針仍存在檢測靈敏度不高、選擇性差、反應時間較長的問題。為了使檢測一氧化氮水平更為精確、可靠，開發有效的熒光探針來檢測一氧化氮十分重要。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的提供一種用于檢測一氧化氮(NO)濃度的熒光探針及其合成方法和應用，熒光探針命名為AQA(包括熒光探針A：AQA-H、熒光探針B：AQA-OCH₃、熒光探針C：AQA-Cl、熒光探針D：AQA-Br)，熒光探針AQA的激發波長范圍在400～430nm、發射波長范圍在480～620nm，每種熒光探針均擁有較大的斯托克斯位移。在體外一氧化氮的檢測中，本發明熒光探針AQA與一氧化氮反應靈敏度高，熒光強度變化明顯。本發明篩選了AQA與NO的反應條件，發現在生理條件下(pH 7.4，25℃)AQA-OCH₃與NO的熒光響應最佳。

本發明第一個目的，是提供一種用于檢測一氧化氮濃度的熒光探針，熒光探針命名為AQA，如式I所示的化合物：

其中，R選自H、OCH₃、Cl、Br。

本發明的第二個目的在于提供一種熒光探針AQA如式I所示化合物的合成方法，以式II所示化合物為原料，與4-硝基鄰苯二胺酰胺化反應獲得式III所示化合物中間產物C；將中間產物C在氯化亞錫存在的條件下，無水乙醇既做H⁺提供劑又做溶劑進行硝基還原反應，得到熒光探針AQA；其合成路線如下：

其中，R選自H、OCH₃、Cl、Br。

進一步地，所述的合成方法具體包括如下步驟：

(1)以式II所示化合物為原料，與4-硝基鄰苯二胺酰胺根據摩爾比為1:1進行先進行酰胺化反應后脫水獲得式III所示化合物中間產物C；

(2)將中間產物C在氯化亞錫存在的條件下，無水乙醇既做H⁺提供劑又做溶劑進行硝基還原反應，得到熒光探針AQA。

其中式II所示化合物：4-硝基鄰苯二胺：氯化亞錫的摩爾比為1：1：4。