本發明提出一種利用液相色譜串聯質譜檢測水產品中晚期糖基化終末產物(AGEs)的方法，包括如下步驟，步驟1：AGEs的提?。徊襟E2：制作標準曲線：以標準品的濃度值為橫坐標，以標準品面積*(內標品濃度/內標品面積)作為縱坐標繪制標準曲線，得到方程；步驟3：將處理后的樣品進行HPLC?MS/MS檢測，檢測模式為MRM，得到樣品中AGEs峰面積，求得樣品中AGEs濃度。本發明目的在于建立一種液相色譜串聯質譜方法，該方法可一次性檢測3種AGEs(羧甲基賴氨酸CML、羧乙基賴氨酸CEL、甲基乙二醛氫咪唑酮MG?H1)，具有分離度好、線性關系好、線性范圍廣等優點。

技術領域

本發明屬于食品有害物質檢測領域，尤其涉及一種檢測水產品中晚期糖基化終末產物的方法。

背景技術

晚期糖基化終末產物(Advanced?Glycation?End-products，AGEs)是在非酶條件下，蛋白質、脂類或核酸等大分子物質的游離氨基與還原糖的醛基發生一系列反應生成的一種穩定化合物。醫學研究結果表明，AGEs與人類諸多疾病的發生有密切關系，而膳食攝入是體內AGEs的重要來源。由于食品樣難處理和AGEs種類繁多，結構復雜等原因，對于食品中AGEs的檢測缺乏通用有效的方法。目前國內外測定AGEs的方法分為儀器法和免疫化學法，前者主要有熒光光譜法和色譜分析法，后者主要是酶聯免疫法(ELISA)。熒光光譜法只適用于測定具有熒光性AGEs和單個AGEs組分的定量，酶聯免疫法ELISA法對抗體的特異性和樣品基質的特異性要求很高。色譜分析法具有高效、高靈敏度、高分辨率的特點，在檢測生物樣品和食品中的AGEs時與質譜儀串聯使用，其靈敏度、選擇性和速度會大大提高。色譜分析法中氣相色譜-質譜法(GC-MS)需要復雜的衍生過程，因此液相色譜-質譜-質譜法(LC-MS/MS)成為了廣大科研工作者的首選?，F有技術中利用LC-MS/MS檢測AGEs的方法僅能檢測一種或兩種AGEs組分，效率較低。

發明內容

本發明針對上述的技術問題，提出一種一次性檢測水產品中3種AGEs組分(羧甲基賴氨酸CML、羧乙基賴氨酸CEL、甲基乙二醛氫咪唑酮MG-H1)的方法，進而對樣品中AGEs做出較為全面準確的分析。

為了達到上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種檢測水產品中晚期糖基化終末產物的方法，包括以下步驟：

步驟1：AGEs的提??；

1.1將樣品溶于硼酸鹽緩沖液和硼氫化鈉溶液，防止后續處理過程導致樣品發生還原反應產生AGEs；

1.2將樣品進行酸解，使與蛋白結合的AGEs解離，轉變成游離態AGEs；

1.3向樣品中加入內標品以校正誤差；

1.4將樣品過固相萃取柱，純化AGEs；

1.5將樣品過濾膜以除掉雜質；

步驟2：制作標準曲線：以標準品的濃度值為橫坐標，以標準品面積*(內標品濃度/內標品面積)作為縱坐標繪制標準曲線，得到方程；

步驟3：將處理后的樣品進行HPLC-MS/MS檢測，檢測模式為MRM，得到樣品中AGEs峰面積，求得樣品中AGEs濃度。

作為優選，步驟1.1為每克凍干樣品中加入20-25mL0.2?mol/LpH9.2的硼酸鹽緩沖液和4-5mL2?mol/L用0.1mol/L氫氧化鈉溶液配制的硼氫化鈉溶液，4℃條件下反應8-10h。

作為優選，步驟1.2酸解條件為每克凍干樣品中加入40-45mL6mol/LHCl，110℃酸解24-26h，氮吹濃縮至近干。