[發(fā)明專利]一種采用流式細胞儀鑒定獼猴桃倍性的方法、解離液及制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201911076307.9 | 申請日： | 2019-11-06 |
| 公開（公告）號： | CN110823654A | 公開（公告）日： | 2020-02-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張茜;王麗華;李嶠虹;莊啟國;李明章;鄭曉琴;何利欽 | 申請（專利權(quán)）人： | 四川省自然資源科學(xué)研究院 |
| 主分類號： | G01N1/28 | 分類號： | G01N1/28;G01N15/14;G01N21/64 |
| 代理公司： | 成都立新致創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 51277 | 代理人： | 吳紅林 |
| 地址： | 610041 四川*** | 國省代碼： | 四川;51 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 采用 細胞 鑒定 獼猴桃 方法 解離 制備 | ||
1.一種適用于流式細胞儀鑒定獼猴桃倍性的解離液，其特征在于，所述解離液中無機鹽的摩爾濃度為0.8～1.2mol/L，所述解離液中緩沖劑的摩爾濃度為3～10mmol/L，所述解離液中聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量分數(shù)為0.8～1.2％，所述解離液中聚乙二醇辛基苯基醚的質(zhì)量分數(shù)為0.2～0.3％；所述解離液的pH為7.0～8.0。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種適用于流式細胞儀鑒定獼猴桃倍性的解離液，其特征在于，所述解離液的pH為7.5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種適用于流式細胞儀鑒定獼猴桃倍性的解離液，其特征在于，所述無機鹽中氯化鉀和硫酸鎂的摩爾比為1：(18～22)；所述緩沖劑為羥乙基哌嗪乙硫磺酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種適用于流式細胞儀鑒定獼猴桃倍性的解離液，其特征在于，所述無機鹽中氯化鉀和硫酸鎂的摩爾比為1：20；所述解離液中羥乙基哌嗪乙硫磺酸的摩爾濃度為5mmol/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種適用于流式細胞儀鑒定獼猴桃倍性的解離液，其特征在于，所述解離液中聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量分數(shù)為0.95～1.05％，所述解離液中聚乙二醇辛基苯基醚的質(zhì)量分數(shù)為0.24～0.26％。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種適用于流式細胞儀鑒定獼猴桃倍性的解離液，其特征在于，所述解離液中聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量分數(shù)為1.0％，所述解離液中聚乙二醇辛基苯基醚的質(zhì)量分數(shù)為0.25％。
7.權(quán)利要求1～6任一項所述的一種適用于流式細胞儀鑒定獼猴桃倍性的解離液的制備方法，其特征在于，包括：將無機鹽、緩沖劑、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇辛基苯基醚按照上述配比稱量后加入容器中，加入雙蒸水定容，再用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.0～8.0，在4℃下保存即可。
8.一種采用流式細胞儀鑒定獼猴桃倍性的方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟一、將獼猴桃葉子放入2～6℃的上述解離液中，再將獼猴桃葉子切成絲狀，解離4～6min，得到第一次解離樣品待用；
步驟二、將第一次解離樣品用40μm的細胞篩網(wǎng)過濾，將濾液在2～6℃下進行第一次離心，棄上清液后補加上述解離液進行第二次離心，棄上清液得到第二次解離樣品待用；
步驟三、向第二次解離樣品中加入染色液，在10～30℃下染色10～20min，將染色后的樣品轉(zhuǎn)移到流式細胞儀的上樣管，上機檢測即可。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種采用流式細胞儀鑒定獼猴桃倍性的方法，其特征在于，所述步驟一中解離的溫度為4℃，解離的時間為5min；所述步驟一中解離液和獼猴桃葉子的質(zhì)量比為1：4。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種采用流式細胞儀鑒定獼猴桃倍性的方法，其特征在于，所述步驟二中第一次離心的溫度為4℃，第一次離心的時間為5min，第一次離心的攪拌速率為1000r/min；所述步驟二中第二次離心的溫度為4℃，第二次離心的時間為5min，第二次離心的攪拌速率為1000r/min；
所述步驟三中染色液為PI/Rase染色液。
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