本發明提供了一種以HCH285發酵所得的固體產物中提取分離bostrycin的方法，包括：(1)固體產物原料的獲得：將HCH285固體發酵方法所得的發酵產物粉碎過篩即得固體產物原料；或將HCH285液體發酵方法所得的發酵液經噴霧干燥后收集得到的固體粉末粉碎過篩即得固體產物原料；(2)提取分離：將所得固體產物原料加入70％～95％的甲醇超聲提取，以固體產物原料為基礎按體積計算，料液比為1：250～1：400g/mL；所述發酵液制得的固體產物原料使用70％～95％的甲醇超聲提取時將pH調至1.5～2.5。該方法能夠成功提取分離醌類化合物bostrycin，且bostrycin的得率高。

技術領域

本發明涉及bostrycin(卷線孢菌素)制備方法領域，特別涉及一種以HCH285發酵所得的固體產物中提取分離bostrycin的方法。

背景技術

醌類化合物bostrycin是一種天然色素產物，最先在1968年由Noda T發現(Nodaet al 19681970)。據文獻報道，bostrycin能夠抑制肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌等腫瘤細胞的生長(Chen et al 2011，Chen et al 2012，陳冬妮2013)，且對卡介苗、結核分枝桿菌均有抑制作用，尤其對多種藥物有耐性的結核分枝桿菌有較好活性(黃宇虹2011)。雖然bostrycin在抗菌、抗腫瘤等多方面表現出較大優勢，但工業合成困難，產量較少，對其深入研究存在局限。而微生物資源豐富，培養成本低廉。利用微生物發酵生產藥物具有生產周期短、產量高等優點。所以，從藥用植物分離獲得產bostrycin的微生物，經發酵后從產物中提取bostrycin，將可以大大提高其產量，具有極大的研究意義。

國內外已有從植物中分離得到產bostrycin內生菌的報道(Xu et al 2010，Xiaet al 2011，Charudattan et al 1982)，但多集中于液體發酵研究，所得產物通常經乙酸乙酯多次萃取后濃縮，再用硅膠柱進行色譜分離，采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇為洗脫劑梯度洗脫，收集一定濃度乙酸乙酯/石油醚的洗脫液，再以聚酰胺柱層析分離，重結晶得紅色顆粒狀晶體化合物bostrycin。此方法主要適用于從發酵液中提取分離bostrycin。但大量發酵液不易長期存放，且bostrycin易受溫度、光照等影響從而發生性質的改變。

本發明人所在的課題組之前篩選到了一株產bostrycin的蘄艾內生菌HCH285，專利號為“201710183008.X”，所述的菌株已于2017年2月23日送至中國典型培養物保藏中心保藏，分類命名：球黑孢菌(Nigrospora sphaerica)HCH285，保藏編號為CCTCC NO：M2017061，地址：中國武漢武漢大學。如何開發一種以固體發酵方法所得發酵產物和發酵液經噴霧干燥后所得固體產物為原料，提取分離醌類化合物bostrycin的方法，成為亟待解決的技術問題。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術之缺陷，提供了一種提取分離醌類化合物bostrycin的方法，該方法能夠成功提取分離醌類化合物bostrycin，且bostrycin的得率高。

本發明這樣實現：

本發明提供一種以HCH285發酵所得的固體產物中提取分離bostrycin的方法，所述方法包括如下步驟：

步驟1、固體產物原料的獲得：將HCH285固體發酵方法所得的發酵產物粉碎過篩即得固體產物原料；或將HCH285液體發酵方法所得的發酵液經噴霧干燥后收集得到的固體粉末粉碎過篩即得固體產物原料；

步驟2、提取分離：將步驟1所得的固體產物原料加入70％～95％的甲醇超聲提取，以固體產物原料為基礎按體積計算，料液比為1：250～1：400(g/mL)；所述發酵液制得的固體產物原料使用70％～95％的甲醇超聲提取時將pH調至1.5～2.5。

本發明具有以下有益效果：