[發(fā)明專(zhuān)利]外周血多潛能細(xì)胞活性物與富血小板血漿復(fù)合物及其制備方法和應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201910680291.6 | 申請(qǐng)日: | 2019-07-19 |
| 公開(kāi)(公告)號(hào): | CN112315978A | 公開(kāi)(公告)日: | 2021-02-05 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 馬亞?wèn)|;黃宗堂;曹娜 | 申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人: | 豐澤康生物醫(yī)藥(深圳)有限公司 |
| 主分類(lèi)號(hào): | A61K35/16 | 分類(lèi)號(hào): | A61K35/16;A61K35/14;A61K31/551;A61P17/02;C12N5/0789 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 外周血多 潛能 細(xì)胞 活性 血小板 血漿 復(fù)合物 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.外周血多潛能細(xì)胞活性物與富血小板血漿復(fù)合物,其特征在于,包括多潛能細(xì)胞活性物、富血小板血漿裂解液和鹽酸法舒地爾,所述多潛能細(xì)胞活性物為外周血多潛能細(xì)胞活性物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的外周血多潛能細(xì)胞活性物與富血小板血漿復(fù)合物,其特征在于,所述復(fù)合物中鹽酸法舒地爾的終濃度為15~30μmol/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的外周血多潛能細(xì)胞活性物與富血小板血漿復(fù)合物的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:
(1)外周血處理后得到外周血干細(xì)胞;
取外周血用磷酸緩沖溶液、清洗并稀釋?zhuān)瑢⑼庵苎尤胫?.2%的I型膠原酶中,置于37℃的溫度下恒溫的水浴箱中,消化處理40min;
然后加入含有10%胎牛血清的LG-DMEM終止消化;
消化后的外周血中加入細(xì)胞裂解液,靜置后過(guò)濾、離心,取出下層沉淀得到外周血干細(xì)胞;
(2)外周血干細(xì)胞體外培養(yǎng);
將外周血干細(xì)胞接種于血清細(xì)胞培養(yǎng)基上,置于37℃的溫度下,含有5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),24h后第一次換液,之后每48h換液一次,待細(xì)胞生長(zhǎng)融合至90%時(shí),以1∶3比例接種于血清細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng);
(3)細(xì)胞培養(yǎng)完成后,收集上清至離心管,過(guò)濾上清除菌;
(4)加入生理鹽水繼續(xù)培養(yǎng)12~24小時(shí),破碎細(xì)胞后離心,收集上清過(guò)濾得到外周血多潛能細(xì)胞活性提取液;
(5)制備富血小板血漿裂解液;
(6)外周血多潛能細(xì)胞活性提取液與富血小板血漿裂解液混合,然后加入鹽酸法舒地爾。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的外周血多潛能細(xì)胞活性物與富血小板血漿復(fù)合物的制備方法,其特征在于,步驟(2)中所述的血清細(xì)胞培養(yǎng)基為含有雙抗的LG-DMEM,其中含有10%胎牛血清。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的外周血多潛能細(xì)胞活性物與富血小板血漿復(fù)合物的制備方法,其特征在于,外周血多潛能細(xì)胞活性提取液與富血小板血漿裂解液按照體積比1∶8~10進(jìn)行混合即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的外周血多潛能細(xì)胞活性物與富血小板血漿復(fù)合物的應(yīng)用,其特征在于,用于治療慢性皮膚潰瘍。
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