本發(fā)明公開了生產(chǎn)蘿卜硫苷的重組菌的構(gòu)建與應(yīng)用。本發(fā)明的生產(chǎn)蘿卜硫苷的構(gòu)建方法，包括增加受體菌中如下蛋白質(zhì)的含量或活性獲得目的重組菌：BCAT3蛋白質(zhì)、GSL?ELONG蛋白質(zhì)、LSU1蛋白質(zhì)、SSU3蛋白質(zhì)、IPMDH1蛋白質(zhì)、CYP79F1蛋白質(zhì)、CYP83A1蛋白質(zhì)、ATR2蛋白質(zhì)、EGT2蛋白質(zhì)、UGT74B1蛋白質(zhì)、ST5c蛋白質(zhì)和FMO_GS?OX1蛋白質(zhì)。實驗證明，利用本發(fā)明的重組菌的構(gòu)建方法可成功獲得能夠生產(chǎn)蘿卜硫苷的重組菌，得到的重組菌可用于生產(chǎn)蘿卜硫苷，具有廣泛的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中，生產(chǎn)蘿卜硫苷的重組菌的構(gòu)建與應(yīng)用。

背景技術(shù)

蘿卜硫素是一種硫代異氰酸酯類化合物，是西蘭花等十字花科類蔬菜抗癌的物質(zhì)基礎(chǔ)。1992年首次由美國約翰-霍普金斯大學(xué)研究人員從西蘭花芽中發(fā)現(xiàn)。蘿卜硫素是目前發(fā)現(xiàn)的所有天然抗癌物質(zhì)里，效力最強的分子，甚至可以使腫瘤縮小。與現(xiàn)有的臨床上使用的抗癌藥物相比，蘿卜硫素具有分子量低、水溶性好等特點。它可以有效地防止胃潰瘍、萎縮性胃炎向胃癌轉(zhuǎn)化。外用時，蘿卜硫素可以保護皮膚免受紫外線輻射損害，從而有可能預(yù)防皮膚癌。最近研究發(fā)現(xiàn)其對II型糖尿病也具有較好的治療效果。蘿卜硫素在植物體內(nèi)以蘿卜硫苷的形式存在。蘿卜硫苷可在人體腸道內(nèi)被轉(zhuǎn)化為蘿卜硫素。由于植物體內(nèi)蘿卜硫苷含量很低，并且存在眾多的結(jié)構(gòu)類似物，天然提取蘿卜硫苷成本較高，目前急需一種快速生產(chǎn)蘿卜硫苷的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是一種可以生產(chǎn)蘿卜硫苷的重組菌的構(gòu)建方法，以及如何利用該重組菌制備蘿卜硫苷。

本發(fā)明提供的重組菌的構(gòu)建方法，包括對受體菌進行如下A1-A11的改造，得到重組菌；

A1、增加所述受體菌中BCAT3蛋白質(zhì)的含量或增強所述BCAT3蛋白質(zhì)的活性；

A2、增加所述受體菌中GSL-ELONG蛋白質(zhì)的含量或增強所述GSL-ELONG蛋白質(zhì)的活性；

A3、增加所述受體菌中LSU1蛋白質(zhì)和SSU3蛋白質(zhì)的含量或增強所述LSU1蛋白質(zhì)和所述SSU3蛋白質(zhì)的活性；

A4、增加所述受體菌中IPMDH1蛋白質(zhì)的含量或增強所述IPMDH1蛋白質(zhì)的活性；

A5、增加所述受體菌中CYP79F1蛋白質(zhì)的含量或增強所述CYP79F1蛋白質(zhì)的活性；

A6、增加所述受體菌中CYP83A1蛋白質(zhì)的含量或增強所述CYP83A1蛋白質(zhì)的活性；

A7、增加所述受體菌中ATR2蛋白質(zhì)的含量或增強所述ATR2蛋白質(zhì)的活性；

A8、增加所述受體菌中EGT2蛋白質(zhì)的含量或增強所述EGT2蛋白質(zhì)的活性；

A9、增加所述受體菌中UGT74B1蛋白質(zhì)的含量或增強所述UGT74B1蛋白質(zhì)的活性；

A10、增加所述受體菌中ST5c蛋白質(zhì)的含量或增強所述ST5c蛋白質(zhì)的活性；

A11、增加所述受體菌中FMO_GS-OX1蛋白質(zhì)的含量或增強所述FMO_GS-OX1蛋白質(zhì)的活性。