本發明涉及一種大氣顆粒污染物生物毒性測試的方法，本發明的目的為彌補當前PM_2.5的生物急性毒性測試中的不足，即單一測試生物不能很好的反映PM_2.5的急性毒性，將多種經實驗篩選過后的特定測試生物組合，構成針對PM_2.5的成組生物毒性測試方法，進一步真實反映PM_2.5毒性大小，是一項非常創新的技術方案。對采集的PM_2.5樣品，用成組生物毒性測試（發光細菌急性毒性測試、斑馬魚胚胎急性毒性測試和體外細胞毒性測試），并利用綜合毒性評價的方法（AvTx、TxPr和MST）將各個測試生物毒性值進行整合得出PM_2.5的綜合生物毒性，與單一生物毒性相比，能夠真實有效的反映PM_2.5的綜合毒性大小。

技術領域

本發明涉及一種大氣顆粒污染物生物毒性測試的方法，具體是利用成組生物毒性測試，并采用綜合毒性評價指標來評價PM_2.5綜合毒性的方法。

背景技術

近年來，大氣污染已成為發展中國家的重大公共衛生問題，尤其是由PM_2.5引發的大氣污染問題是影響人類健康的主要環境問題之一。我國作為最大的發展中國家，近幾年來受PM_2.5的影響日益嚴重。由于不同測試生物的敏感性不同，從而導致單一生物毒性測試無法真實反映PM_2.5的毒性。

發明內容

本發明的目的為彌補當前PM_2.5的生物急性毒性測試中的不足，即單一測試生物不能很好的反映PM_2.5的急性毒性，將多種經實驗篩選過后的特定測試生物組合，構成針對PM_2.5的成組生物毒性測試方法，進一步真實反映PM_2.5毒性大小，是一項非常創新的技術方案。

成組生物毒性測試建立在單一生物毒性測試的基礎上，通過實驗篩選發光細菌、斑馬魚胚胎和人肺腺癌細胞（A549）等三種測試生物。其中斑馬魚及其胚胎是非常理想的生物模型，斑馬魚作為毒理學模式生物具有低成本、易飼養、易觀察、產卵量大、對毒性物質反應靈敏等特點，并與人類基因具有75%的相似度，更重要的是斑馬魚與哺乳動物的組織器官、系統、生理、發育和代謝高度相似；發光細菌作為一種快速、靈敏和便捷的毒性檢測生物，敏感性高；體外細胞毒性測試具有重復性好、實驗組間差異小等優點，而肺上皮細胞是顆粒物主要接觸的靶細胞，因此，將A549肺上皮細胞作為細胞毒性實驗的受試對象更能實際反應PM_2.5對人呼吸系統的影響；實驗結果結合綜合毒性評價指標對PM_2.5毒性進行評價，與單一生物毒性相比，能夠真實有效地反映PM_2.5的綜合毒性大小。

本發明是通過以下技術方案實現的，具體包括如下步驟：

1. 在前處理中，利用酒精消毒后的陶瓷剪刀將采集有PM_2.5的濾膜剪成0.5 cm×0.5cm大小的碎片，加入30 mL超純水，置于超聲振蕩器（加入冰袋保持水溫在20℃以下）中振蕩3次，每次20 min，將超聲振蕩后PM_2.5混合物通過8層無菌紗布過濾，得到PM_2.5洗脫液并進行真空冷凍干燥，隨后稱重PM_2.5粉末的重量；

2. 利用成組生物毒性測試方法包括發光細菌急性毒性測試、斑馬魚胚胎急性毒性及發育毒性測試和體外A549細胞毒性測試，分別對PM_2.5進行綜合生物毒性測試；

3. 利用平均毒性法（average toxicity，AvTx）、毒性指數（toxic print，TxPr）和最敏感測試（most sensitive test，MST）等三種綜合評價指標對三種測試生物毒性進行整合從而得出PM_2.5綜合生物毒性大小。

具體實施方式