本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及一種黃秋葵內參基因EF?1α及其應用。本發明公開了一個用于黃秋葵內參基因的轉錄延伸因子基因(EF?1α)序列，在此基礎上設計定量特異引物，轉錄延伸因子基因(EF?1α)基因在黃秋葵果實發育階段及高溫脅迫下均能穩定表達，適合在黃秋葵基因在果實發育階段及高溫脅迫下表達研究中作為內參基因。本發明首次將轉錄延伸因子基因(EF?1α)作為內參基因用于黃秋葵基因在果實發育階段及高溫脅迫下表達分析，有利于提高黃秋葵基因在果實發育階段及高溫脅迫下表達分析研究的穩定性、可靠性和重復性；本發明提出的檢測引物具有特異性，大大的提高了檢測效率，提高了檢測結果的可信度。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及一種黃秋葵內參基因EF-1α及其應用，具體地，利用該黃秋葵內參基因的核苷酸序列為基礎設計一對熒光定量特異引物。

背景技術

黃秋葵（Hibiscus esculentus L.），秋葵屬，原產于非洲東北部，世界栽培廣泛，近年來，國內引進推廣較快，栽培面積逐年增長。黃秋葵以食嫩果為主，含豐富蛋白質、維生素及礦物鹽、糖聚合體等營養成分，是一種具有較高營養價值、保健功能的健康蔬菜。隨著其分子生物學研究的不斷深入和發展，基因表達分析正逐漸應用于揭示黃秋葵基因調控機理的研究中。在基因表達分析時，為了消除不同組織細胞間初始模板量、RNA質量、酶促反應效率等的偏差，往往需要引入內參基因對其進行校正。理想的內參基因應該在不同組織類型、生長階段及不同實驗條件下表達水平均保持一致，實際研究中常選擇穩定表達的看家基因，如肌動蛋白基因(actin)、18S、轉錄延伸因子基因(EF-1α)、α微管和β微管蛋白基因((TUA、TUB))、18S核糖體RNA(18S rRNA)等作為內參基因。

真核生物延伸生長因子基因(EF-1α)在蛋白質翻譯過程中起著重要的作用，其序列具有高度的保守性，是一種管家基因。在高等植物體內，延伸生長因子基因(EF-1α)參與生物體的基本生化代謝過程。但目前關于黃秋葵延伸生長因子基因(EF-1α)基因的克隆和作為黃秋葵內參基因的研究還未見報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于提供一種黃秋葵內參基因(轉錄延伸因子基因EF-1α)，并揭露了利用該黃秋葵內參基因為基礎設計的實時熒光定量PCR引物。

本發明通過以下技術方案解決上述技術問題：

一種黃秋葵內參基因 EF-1α，所述內參基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；且該內參基因是以黃秋葵DNA為模板、并以如下引物對進行PCR擴增反應所得的；

其中引物對為：

正向引物5'- TTCCGAGTTCTATAATGGGTAA -3'，

反向引物5'- ACGCCACAGCTTATTTCTTC -3'。

進一步地，以所述內參基因的核苷酸序列為基礎，利用Primer Premier5.0 軟件、并遵循實時熒光定量PCR引物設計的原則設計出一對熒光定量特異引物，該對熒光定量特異引物即為所述實時熒光定量PCR引物；

且該實時熒光定量PCR引物為：

正向引物5'- GCTGCCAAGAAGAAATAAGC -3'，

反向引物5'- ATGAAGCAAACCTCGACACT -3'。

本發明的有益效果在于：