[發明專利]川桑色氨酸羥化酶T5H2及其應用在審
| 申請號： | 201910342321.2 | 申請日： | 2019-04-26 |
| 公開（公告）號： | CN111849931A | 公開（公告）日： | 2020-10-30 |
| 發明（設計）人： | 趙愛春;鄭莎;劉長英;朱映雪;張帥;夏中強;向仲懷 | 申請（專利權）人： | 西南大學 |
| 主分類號： | C12N9/02 | 分類號： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12P17/10 |
| 代理公司： | 重慶航圖知識產權代理事務所(普通合伙) 50247 | 代理人： | 王貴君 |
| 地址： | 400715*** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 色氨酸 羥化酶 t5h2 及其 應用 | ||
1.一種川桑色氨酸羥化酶T5H2，其特征在于：所述色氨酸羥化酶T5H2的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.根據權利要求1所述川桑色氨酸羥化酶T5H2，其特征在于：編碼川桑色氨酸羥化酶T5H2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
3.一種川桑色氨酸羥化酶基因T5H2，其特征在于：所述川桑色氨酸羥化酶基因T5H2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
4.權利要求1所述川桑色氨酸羥化酶T5H2在作為色胺轉化為5-羥色胺的催化劑中的應用。
5.權利要求3所述川桑色氨酸羥化酶基因T5H2在宿主細胞中重建褪黑素合成途徑中的應用，其特征在于：所述T5H2為催化色胺轉化為5-羥色胺的關鍵酶基因。
6.一種制備重組川桑色氨酸羥化酶T5H2的方法，其特征在于：所述將如SEQ ID NO.3所示的川桑色氨酸羥化酶基因T5H2連入Pcold-tf質粒KpnⅠ和ECORI酶切位點，獲得重組表達載體Pcold-tf-T5H2，再將獲得的重組表達載體轉化表達菌株B21(DE3)，在28℃、IPTG終濃度為1mM條件下誘導表達，提取，純化，獲得重組川桑色氨酸羥化酶T5H2。
7.根據權利要求6所述制備重組氨酸羥化酶T5H2的方法，其特征在于：所述提取的方法是收集菌體，在功率為200W條件下超聲破碎，超聲總時間15min，每超聲1s，暫停3s；然后在4℃、15000g條件下離心20min，收集上清。
8.根據權利要求6所述制備重組川桑氨酸羥化酶T5H2的方法，其特征在于：所述純化是使用鎳柱純化，用含咪唑濃度為100mM的洗脫液進行洗脫。
9.由權利要求6～8任一項所述的方法制得的重組川桑氨酸羥化酶T5H2。
10.權利要求9所述重組川桑氨酸羥化酶T5H2在作為色胺轉化為5-羥色胺的催化劑中的應用。
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