[發明專利]基于碳量子點檢測酸性磷酸酶活性的熒光分析方法在審
| 申請號： | 201910061473.5 | 申請日： | 2019-01-23 |
| 公開（公告）號： | CN109632757A | 公開（公告）日： | 2019-04-16 |
| 發明（設計）人： | 翁少煌;陳育源;林新華;王珍珍;郝曉麗 | 申請（專利權）人： | 福建醫科大學 |
| 主分類號： | G01N21/64 | 分類號： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 福州智理專利代理有限公司 35208 | 代理人： | 王義星 |
| 地址： | 350122 福建省福州市*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 酸性磷酸酶 熒光分析 量子點 酸性磷酸酶活性 檢測 量子點檢測 多巴胺 人血清樣品 方法選擇 臨床檢測 線性相關 熒光變化 熒光淬滅 磷酸酶 中酸性 淬滅 熒光 回收率 | ||
1.一種基于碳量子點檢測酸性磷酸酶活性的熒光分析方法，其特征在于，包括如下步驟：配置含有不同濃度酸性磷酸酶的緩沖溶液、加入碳量子點和多巴胺進行孵育反應，測定碳量子點的熒光來檢測酸性磷酸酶活性。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述碳量子點（CDs）是由2g檸檬酸和0.6g谷胱甘肽熔融后加入8 mL多乙烯多胺反應90 min制備得到的。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述CDs的最大激發波長為350 nm，發射波長為452nm。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，對反應時間10、20、40、60、80、100、120min和反應溫度25、30、37°C進行優化。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，對緩沖溶液的類型進行優化，其中緩沖溶液為pH6.0的PBS、Tris-HCl、NaAC-HAC。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，對PBS緩沖液的pH進行優化，其中pH值為4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，對底物DA的濃度進行優化，其中DA濃度為0、10、30、50、100、200、300、400、500、600、700μM。
8.如權利要求4-7任一所述的方法，其特征在于，選取100min作為最優反應時間，25℃作為最優反應溫度，400μM DA作為最優底物濃度，10mM pH 7.0的PBS作為反應體系的緩沖溶液。
9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述酸性磷酸酶濃度為0、1、5、10、20、30、40、50、60、80、100、150、200、250、300、400、500U/L。
10.一種酸性磷酸酶的定量檢測方法，通過熒光分光光度法對加入不同濃度酸性磷酸酶的碳量子點進行熒光檢測，其特征在于，所述熒光分光光度法中使用的溶液由PBS、CDs、酸性磷酸酶和多巴胺混合而成；通過所述熒光分光光度法繪制的吸收光譜曲線方程為：Y=16.0251+2.52176X，R2=0.99312，其中Y為CDs的熒光淬滅值；X為酸性磷酸酶的活性濃度，最低檢測限（LOD）=0.45 U/L；所述溶液中CDs的濃度為25μg/mL。
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