[發明專利]環介導等溫擴增單增李斯特菌的引物、試劑盒及檢測方法在審
| 申請號： | 201910027710.6 | 申請日： | 2019-01-11 |
| 公開（公告）號： | CN109593866A | 公開（公告）日： | 2019-04-09 |
| 發明（設計）人： | 朱麗萍;顏世敢 | 申請（專利權）人： | 齊魯工業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 250353 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 李斯特菌 引物 試劑盒 環介導等溫擴增 檢測 空白對照 特異性強 陽性對照 陰性對照 陽性DNA 樣品DNA 對引物 靈敏度 | ||
1.一種環介導等溫擴增單增李斯特菌的檢測引物、檢測試劑盒及檢測方法，其特征在于包括檢測引物、試劑盒及檢測方法。
2.根據權利要求1所述的檢測引物，其特征在于包括2對引物，序列如下：
引物F3：5’-AATGCCACTAAATCAAACGT-3’(SEQ ID No.1)，
引物B3：5’-GCGCCGAAGTTTACATTCA-3’(SEQ ID No.2)，
引物FIP：5’-ACTTACATTTGGATAAGCTTGAGCAACGCAGTAAATACATTAGTGGAA-3’(SEQ IDNo.3)，
引物BIP：5’-TTATGATGACGAAATGGCTTACAGTCAGCTTTAAATGCTGTACCAA-3’(SEQ IDNo.4)。
3.根據權利要求1或2所述的檢測引物，其特征在于每25ul LAMP反應液中含有引物F3、B3各5pmol，引物FIP、BIP各40pmol。
4.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于包括LAMP反應液、陽性DNA模板以及權利要求1或2所述的2對引物。
5.根據權利要求1或4所述的LAMP反應液，其特征在于每25μL LAMP反應液，含有以下組分：20mM Tris-HCl(pH8.8)，10mM KCl，8mM MgSO4，10mM(NH4)2SO4，0.1％吐溫20，0.8M甜菜堿，1.4mM dNTPs，8U Bst DNA聚合酶，0.05mM鈣黃綠素，0.6mM MnCl2，用滅菌雙蒸水補足體積至25ul。
6.根據權利要求1或4所述的陽性DNA模板，其特征在于DNA序列為:AATGCCACTAAATCAAACGTTAACAACGCAGTAAATACATTAGTGGAAAGATGGAATGAAAAATATGCTCAAGCTTATCCAAATGTAAGTGCAAAAATTGATTATGATGACGAAATGGCTTACAGTGAATCACAATTAATTGCGAAATTTGGTACAGCATTTAAAGCTGTAAATAATAGCTTGAATGTAAACTTCGGCGCA(SEQ ID No.5)的DNA片段的pMD18-T重組質粒。
7.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于在反應管內添加2對引物、LAMP反應液、陽性DNA模板或待檢樣品DNA，混勻，在59-65℃范圍內選擇某一固定溫度恒溫擴增30-60分鐘，然后85℃作用5分鐘終止反應。
8.根據權利要求1所述的檢測引物、試劑盒和檢測方法，其特征在于在檢測臨床樣品里存在的單增李斯特菌中的應用。
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