本發(fā)明公開了一種甘草ISSR熒光分子標記引物及其應用，本發(fā)明利用ISSR熒光分子標記技術對甘草材料進行總DNA提取、PCR反應體系優(yōu)化及穩(wěn)定性檢測，篩選出帶有ISSR熒光分子標記序列，將符合ISSR引物設計要求的序列進行ISSR引物開發(fā)，該引物對甘草屬不同物種之間的鑒定和聚類分析具有重要意義能對甘草屬內藥用甘草物種與其近緣種進行區(qū)分鑒定，使得藥用甘草物種與其近緣種容易被區(qū)分，避免了甘草藥用情況混亂，確保了甘草臨床用藥的有效性和安全性。為甘草資源保駕護航。

技術領域

本發(fā)明涉及一種甘草ISSR熒光分子標記引物及其應用，特別是一種對藥用甘草及其近緣種親緣關系的鑒定的甘草ISSR熒光分子標記引物。

背景技術

甘草，豆科植物多年生草本。甘草屬Glycyrrhiza Linn.全球約20個物種，在亞洲、歐洲、澳洲、美洲等地都有分布，我國有8個種，分為2個組-甘草組Sect.Glycyrrhiza和刺果甘草組Sect.Pseudoglycyrrhiza E.U.Krug.，其中，甘草組Sect.Glycyrrhiza中包含甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)、光果甘草(Glycyrrhizaglabra L.又名洋甘草)、脹果甘草(Glycyrrhiza inflate Batal.)、無腺毛甘草(Glycyrrhiza eglandulosa X.Y.Li.)和粗毛甘草(Glycyrrhiza aspera Pall.)5個物種，刺果甘草組Sect.PseudoglycyrrhizaE.U.Krug.包含刺果甘草(Glycyrrhizapallidiflora Maxim.)、云南甘草(Glycyrrhizayunnanensis Cheng f.et L.K.Dai ex P.C.Li)和圓果甘草(Glycyrrhizasquamulosa Franch.)3個物種^[1]。2015版《中華人民共和國藥典》中明確指出我國藥用甘草為甘草(G.uralensisFisch.)、光果甘草(G.glabra L.)及脹果甘草(G.inflata Bat.)的干燥根及根莖。具有補脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調和諸藥的功效。

甘草的藥用和商用價值很高。在我國，甘草作為大宗藥材，素有“十方九草”之稱，且由于其無毒，可以藥食同源，被《神農本草經》列為上品。此外，甘草還用于生活、畜牧和化工的多個方面。作為甘草產出大國，我國甘草資源豐富，但也確實存在諸多問題：

甘草廣泛的藥用和商用價值促使甘草需求量逐年增加，野生甘草資源因大量采挖急劇下降。盡管建國以來，國家對其進行了資源保護的同時，并大力提倡人工種植，但部分研究結果表明，栽培甘草和野生甘草的有效成分含量差異較大，甚至部分栽培甘草的質量根本達不到《中華人民共和國藥典》標準。

申請人在進行甘草資源調查過程中還發(fā)現：人工種植甘草中存在諸多變異和雜交現象，很難界定它的分類以及明確其是否為藥用甘草基源物種，這就使得甘草用藥的安全性和有效性受到了很大質疑。

從國外引進優(yōu)良甘草種質進行選育或直接進口采購也是解決國內甘草市場資源短缺的問題的可行方法之一，但全球甘草屬下物種較多，國外甘草種屬在我國是否適合藥用也是我們需要亟待解決的問題。

基于以上原因，申請人發(fā)現，想要維持甘草市場的穩(wěn)定發(fā)展，甘草屬植物資源的保護、優(yōu)質品種的篩選和屬內物種的準確鑒別顯得尤為重要。而解決這些問題的基礎是甘草親緣關系的鑒定。